The aim of these experiments was to investigate the effects of oviduct epithelial cells on bovine in vitro fertilization. Oviduct epithelial cell monolayers (OEC) on the 4-well dish were prepared according to general procedures. Monolayers were formed within 5days. The medium for OEC culture (TCM199 with 10% FBS) was replaced with IVF-TALP 2h before each experiment. Macromolecules/proteins from oviductal conditioned medium (OM) were recovered by ultrafiltration, which desalted and concentrated macromolecules greater than 5kDa, and this OM were added to W medium (experiment 1). The cleavage rate in OM+OEC group was significantly higher than in OM group (p〈0.01). In this experiment 2, oocytes were inseminated on OEC with sperm which had been pre-incubated with OEC for 0 or 4h before insemination. In this experiment, oocytes were exposed to sperm only 8 h for clarifying the effect. After insemination, oocytes were cultured in CRlaa. At 42 h post insemination, oocytes were denuded and examined for evidence of cleavage. The cleavage rates of oocytes which were inseminated with OEC treated sperm for 4 h were significantly higher than those of the other group (p〈0.01). In conclusion, sperm released from OEC have more fertilizing ability than those before attachment.
소 체외수정란의 체외배양 체계는 현재 완전히 확립되지는 않은 상태로서 8∼16 세포기 발육억제현상, 수정란의 파편하 현상, 성장지연 등 여러 가지 문제점들이 현 배양체계에서 나타난다. 그러나 hepler cell들과의 공배양에 의해 이러한 문제점들은 상당히 극복되며 또한 체외발생의 촉진 및 공배양된 수정란의 이식에 의해 임신율도 향상된다. 현재 소 체외수정란의 공배양에는 난관상피세포가 가장 널리 이용되나 이러한 시스템은 몇가지 문제점이 있다. 즉, primary culture를 확보하기 위하여 신선한 조직을 주기적으로 채취해야 하며 따라서 난관채취에 시간이 소요되고, 불편하며 또한 공배양에 이용되는 세포들이 균일하지 않은바 난관상피세포에 따라 배 발생 촉진작용에 변이를 나타내기도 한다. 그러나 확립된 cell line을 이용할 수 있다면 이러한 난관상피세포의 이용에서 나타나는 문제점들이 해결될 수 있다. Buffalo Rat Liver cell은 이러한 목적에 이용될 수 있는 cell line 중의 하나로서 이들은 여러 가지 성장인자(growth factor)를 분비하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본고에서는 소 체외수정란의 공배양을 위한 BRL(Buffalo Rat Liver)cell의 이용성, 이용방법 및 이용에 있어서 고려하여야 할 요인들에 대하여 살펴보고자 한다.
수정란이식 기술이 활성화되고, 한우의 가격이 상승하여, 젖소에 한우 체외수정란이식이 성행하고 있으나, 수정란이식에 의한 수태율은 수정란이식의 성과를 내고 있다고 할 정도는 아니다. 쥐, 돼지 및 사람에서 착상에 관련되는 인자에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있으며, 가장 착상에 관여를 많이 하고 있는 인자는 LIF, IGF와 TGF-β인 것으로 보고되고 있다. 따라서 본 연구는 임신과 관련된 주요기관인 난관의 상피세포를 체외배양하고, 그때 착상을 유도하는 것으로 알려진 IL-1α와 β를 첨가하여 IGF-I의 생산을 조사하였다. (중략)
Seo, Hee-Won;Kim, Sun-Young;Shin, Sang-Su;Kim, Tae-Min;Lee, Young-Mok;Lee, Bo-Ram;Kim, Tae-Wan;Lim, Jeong-Mook;Han, Jae-Yong
Proceedings of the Korea Society of Poultry Science Conference
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2006.11a
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pp.80-81
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2006
닭의 유전자 지도가 밝혀지고 그와 관련한 생물학적 연구들이 활발히 이루어지면서 닭을 생체 반응기나 질병 모델 동물로 이용하기 위한 연구가 많이 진행되고 있다. 이 중 닭을 생체 반응기로 이용하기 위해서는 많은 양의 단백질을 생산하는 난관에 대한 연구가 필수적이다. In vivo와 in vitro에서 난관 특이적 프로모터에 의한 외래 유전자의 발현에 대한 연구를 하였고 유전자를 전이하는 방법으로는 렌티 바이러스 시스템을 이용하였으며, 프로모터는 난관 특이적 프로모터인 오브알부민 프로모터 (5‘ 조절 부분의 1.4kb)와 RSV 프로모터를 이용하였다. 리포터 유전자로는 형광발현 단백질 (enhanced green fluorescence protein, EGFP)을 이용해서 마우스 배아 섬유아세포, 닭 배아 섬유아세포, 난관 상피 세포에서 발현을 유도해서 조직 특이적 발현 여부를 확인하였다. 그 결과 RSV 프로모터는 모든 세포에서 발현하였으나, 오브알부민 프로모터에 의한 리포터 유전자의 발현은 난관 상피 세포에서는 특이적으로 발현하였다. 이와 같은 연구는 산란계를 이용해서 난관으로부터 효율적인 생리 활성 물질을 생산하기 위한 가능성을 보여주었다.
Scanning electron microscopic observation of the oviductal epithelium was carried out on the virgin white Wistar rat during normal sexual cycle, and obtained the results as follows; Rat oviductal epithelium during the normal sexual cycle generally consisted of two types of cells: ciliated and non-ciliated cell. The ciliated cells had cilia which was measured $0.2{\mu}$ in width and $3-5{\mu}$ in length. According to the length of microvilli and the distribution in each segment, the non-ciliated cell was further subdivided into four types of cells; NC-I, NC-II, NC-III, and NC-IV. The morphologic characteristics of each type of cells were also ascertained by SEM observations.
정상(正常) 및 홀몬처리한 rat난관(卵管) 상피세포(上皮細胞) 특(特)히 섬모세포(纖毛細胞)에서 mitochondrial crystalloid구조를 관찰하여 2가지 형(型)으로 구분하였다. 제(第) 1 형(型)은 mitochondria장축에 대해 경사의 형태로, 제(第) II 형(型)은 평행의 형태로 출현하였다. 이들 구조는 길이 $0.5{\sim}1.2{\mu}m$, 폭 $0.1{\sim}0.2{\mu}m$이며 10nm 간격의 전자밀도가 높은선과 밝은선의 교차를 이루고 있었다. 또한 이들 구조는 정상(正常) 성주기(性週期)에서는 주로 발정기(發情期) 및 발정후기(發情後期)에, 홀몬처리시는 progesterone처리 시보다 estradiol 처리시에 다수출현(多數出現)하는 경향이었다. 이들 구조의 출현의의(出現意義)에 대해서 논(論)하였다.
This experiment was carried out to evaluate the effect of mouse early embryonic development in vitro by co-culture with bovine and porcine oviductal epithelial cells(BOEC and POEC). The 2-cell embryos were collected from the oviducts of the superovulated and mated does with D-PBS/15% FCS at 48 hours after hCG injection. The in vitro developmental rate of blastocyst formation and the number of nuclei in the embryos were examined. For a comparative study of in vi패 and in vitro development, the fresh blastocyst which developed in vivo for 120 hours after hCG injection was collected from the uterus, and their numbers of nuclei were also counted. The higher developmental rates of blastocyst formation was a, pp.ared from 91% to 97% when the embryos were co-cultured with a monolayer of bovine or porcine oviductal epithelial cells in TCM 199 or Ham's F-10 and MediCult IVF media. No significant difference in developmental rates was shown between bovine and porcine oviductal eptithelial cells. The number of nuclei in the embryos cultured for 72 hours under each conditions was significantly reduced it than blastocyst in vitro conditions. The number of nuclei in embryos cultured in TCM 199, Ham's F-10 and Medicult IVF medium were counted 68.1$\pm$6.00, 67.3$\pm$4.49, 66.4$\pm$5.64, and 94.3$\pm$8.61, 92.5$\pm$7.60, 92.1$\pm$6.10 with BOEC and 93.3$\pm$5.80, 92.9$\pm$6.53, 92.3$\pm$7.35 with POEC coculture, respectively. These numbers were lowered than 107.2$\pm$7.43 in vivo conditions. In conclusions, the coculture between the mouse early embryos, and oviductal epithelial cells of BOEC and POEC give to improve the developmental and hatching rates of blastocyst but in vivo culture systems for the growth of nuclei were ineligible than in vitro conditions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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