본 연구에서는 온실가루이 방제를 위하여 감염된 이병체로부터 균주 분리 및 농촌진흥청 및 경상북도농업기술원에서 균주를 분양 받아 5 종의 균주를 확보하여, 최종적으로 활성이 가장 높은 분리균주 M130을 선발하였다. Beauveria bassiana M130을 이용하여 균주가 갖는 효소학적 활성을 분석하였다. Chitinase와 protease의 활성을 조사한 결과, 타 균주에 비하여 높은 효소학적 활성을 가지는 조건을 얻었으며, 선발된 균주의 포자생산의 최적화를 위한 방안으로 PDB (potato dextrose broth)배지와 미강추출물을 이용한 ERBM (extracted rice bran medium)을 비교하여, 더 높은 생육도와 포자 생성량을 보인 ERBM을 본 균주를 배양하는 기본배지로 선발하였다. ERBM을 이용한 액체배양시의 최적조건으로, 기본배지인 ERBM에 0.5% $(NH_4)_2SO_4$를 첨가하여 pH 5, $28^{\circ}C$에서 배양최적화를 하였다. 향후 곤충병원성곰팡이 Beauveria bassiana M130의 최적화 조건에 따라 배양을 한다면 포자의 생산량 및 방제효과가 높아질 것으로 사료된다.
파밤나방(Spodoptera exigua)은 유기합성 농약을 이용한 화학 살충제 외에 뚜렷한 방제방법이 알려져 있지 않으나, 그에 대한 저항성과 더불어 식물을 가해하는 방법에 있어 그들만의 독특한 숙주 가해습성으로 인해 난방제 해충으로 알려져 있다. 화학살충제에 대한 저항성의 해결을 위하여 곤충병원성 바이러스 및 세균을 이용한 살충제가 개발되어 있으나, 이들 역시 파밤나방 유충이 줄기 속으로 들어가는 가해습성으로 인하여 효과적이지 못한 실정이다. 그러므로 본 연구에서는 그들의 가해습성과 저항성을 극복할 수 있는 새로운 방제원으로써, 체벽과의 일시적인 접촉을 통해 살충성을 발휘할 수 있는 파밤나방에 대한 병원성 곰팡이를 분리하고 그 특성 및 살충성을 조사하였다. 파밤나방 병원성 곰팡이는 파밤나방 누대사육 중 곰팡이병 증상을 보이며 이병된 사충으로부터 분리하였으며, 분리 곰팡이는 배지에서의 증식상 및 현미경적 관찰을 통한 형태학적 동정과 더불어 ITS, ${\beta}$-tublin 및 EF1-${\alpha}$ 부분의 염기서열 분석을 통해 Nomuraea rileyi로 최종 동정하고 N. rileyi SDSe로 명명하였다. 분리 균주의 파밤나방에 대한 살충력 검정은 $1{\times}10^4-10^8conidia/ml$까지의 다양한 포자현탁액에 파밤나방 3령 유충을 침지하는 조건으로 수행한 결과, 20-54%의 살충률을 나타냈으며 포자현탁액의 농도가 증가할수록 살충력도 증가하는 양상을 나타냈다. 본 연구결과 분리된 N. rileyi 균주가 비록 높은 살충력을 보이지 않았으나, 파밤나방이 난방제 해충임을 감안할 때 다른 방제방법과 함께 종합적 해충 방제 방법에 있어 효과적인 방제수단의 일환이 될 수 있을 것으로 기대된다.
Biological control of turfgrass insect pest Blitopertha orientalis, forest insect pests, Agelastica coerulea, Meganola melancholia, and Glyphodes perspectalis,vegetable insect pests, Plutella xylostella and Agrotis segetum were conducted with entonopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae J-22 isolated from black pine forest soil in Cheju province. Mortality of B. orientalis larvae was 53.3% at the rate of 3.4 $\times$ 1O 7 conidia /ml. A. coerulea and M melancholia larvae showed 100% mortalities at 9.6 $\times$ 106 conidia /ml and 2.7 $\times$ 10 7 conidia /ml as well. However, G. perspectalis larvae were not dead even at 4$\times$ 1O 7 conidia /ml. On the other hand, M anisopliae J-22 was effective against P. xylostella larvae showing 100% mortality at 4 $\times$ 10 7 conidia /ml. KEy words:Entomopathogenic fungi, Biological control, Metarhizium anisopliae, Pathogenicity,Blitopertha orientalis, Agelastica coerulea, Meganola melancholia, Glyphodes perspectalis,Plutella xylostella, Agrotis segetum.
Several entomopathogenic fungi have been exploited to be developed into biological control agents in insect pest management. The beet armyworm, Spodoptera exigua, is a serious insect pest infesting various crops, but not effectively controlled by commercial chemical pesticides due to its high insecticide resistance. A fungal isolate was isolated from S. exigua larvae collected from cabbage field in Andong, Korea. The fungus could be cultured in potato dextrose agar. Larvae of S. exigua injected with the cultured conidia showed a potent entomopathogenicity. To identify the fungus isolate, its internal transcribed space (ITS) and surrounding partial 18S/28S regions were sequenced. The ITS sequence was highly matched (99%) to that of Nomuraea rileyi. Morphological characters of its hyphae and conidia were well fit to those of known N. rileyi. This study reports the first record of an entomopathogenic fungus, N. rileyi, in Korea.
충남 논산시의 천적생산업체인 세실의 점박이응애 사육장에서 발견된 곰팡이를 조사한 결과 Neozygites floridana 1종이 동정되었다. 종 동정은 형태학적 현미경적 특징과 DNA 염기서열 분석을 통해 이루어졌다. 곤충조직배양용 전용배지(Grace's insect tissue culture medium + 5% fetal bovine serum)에서 이 균의 생존을 확인할 수 있었다. 강낭콩 군락 내에서의 감염률은 36.1%이었다. 점박이응애는 잎의 윗면보다 뒷면에 상대적으로 높게 밀집되어 있었다. 곰팡이의 감염률은 윗면보다 뒷면에서 매우 높게 나타나, 균 발생 진단을 위해서는 잎 윗면보다는 뒷면을 확인하는 것이 요구된다. 이 균에 대하여 천적 생산을 위한 방제방법과 더불어 작물을 가해하는 점박이응애 방제를 위한 생물적 조절인자로서의 가능성에 대한 연구가 필요하다.
To optimize the culture conditions for Beauveria bassiana 726, the effects of culture medium, pH, and temperature on mycelium and spore production were investigated. The optimum temperature and pH for the cultivation of B. bassiana 726 were 28 $^{\circ}C$ and 5.0, respectively. The optimized medium was composed of 1.0~2.0% total sugar from molasses, 0.5% corn steep liquor and 0.05% KH$_2$PO$_4$. In the cultivation of B. bassiana 726 with the optimum medium, the specific growth rate and substrate utilization were well-fitted with the proposed kinetic model in the shake flask and stirred tank reactor. When the fed-batch cultivation using carbon suorce, nitrogen source, and mineral salt as a feeding medium was compared with batch cultivation in stirred tank reactor, mycelium (12.7 g/L) and spore production (5.4$\times$$10^8/mL$) were enhanced up to 110% and 85%, respectively.
The silverleaf whitefly, Bemisia tabaci, is a major pest distributing worldwide damaging over 900 host plant species, and is highly resistant to chemical pesti- cides. Due to the high pesticide resistance of whitefly, there is a need for alternatives to chemical control. Entomopathogenic fungi are candidates for biological pesticide that can overcome the resistance problem of chemical pesticide. Therefore, in this study, we tested pathogenicity of the entomopathogenic fungi to select high insec- ticidal activity against whitefly. As a result, IPBL-C (Cordyceps fumosorosea) and IPBL-F (Metarhizium pinghaense) isolates showed high insecticidal activity against whitefly. Additionally, as a result of culturing the selected isolates on spent coffee grounds medium, the conidia of IPBL-F produced on coffee grounds medium showed five times higher heat stability after heat treatment at 45℃ for one hour than conidia produced on PDA medium.
고추의 주요 병해충인 총채벌레(Thrips palmi)와 탄저병(Colletotrichum acutatum)을 방제하기 위해 다양한 화학농약이 사용되고 있지만, 농약의 오남용으로 인하여 이에 대한 저항성이 발생하여 방제가 힘들어지고 환경오염을 초래하는 문제가 있다. 그리하여 본 연구에서는 이러한 문제를 극복하고자 총채벌레에 대한 살충효과와 탄저병에 항균력이 우수한 균주를 선발하여 동시 방제의 가능성을 확인하고자 하였다. 토양으로부터 분리한 곤충병원성 곰팡이 13균주($1{\times}10^7conidia/mL$)를 오이총채벌레 성충과 약충에 처리하여 70~100%의 우수한 살충률을 나타내는 6균주를 선발하였다. 선발한 6균주의 항균활성을 검정하기 위하여 고추 탄저병균에 대치 배양한 결과, 항균력이 우수한 FT333 균주를 최종 선발할 수 있었다. 최종 선발된 균주를 형태학적 조사와 internal transcribed spacer, ${\beta}-tubulin$ 영역의 염기서열 분석을 통하여 Isaria javanica로 동정하였고, I. javanica FT333으로 명명하였다. I. javanica FT333 (KACC93316P)의 고추 탄저병균에 대한 방제 효과를 기내에서 검정한 결과($1{\times}10^5$, $1{\times}10^6$, $1{\times}10^7conidia/mL$) 95% 이상의 방제효과를 나타내었다. 이러한 결과들을 바탕으로 I. javanica FT333 균주가 고추 탄저병균과 미소해충인 오이총채벌레를 동시에 방제하기 위한 미생물제제로서 이용될 수 있는 가능성을 제시하였다.
국내 미기록 진딧물병원성 곰팡이, Conidiobolus obscurus와 C. thromboides.를 1998년 6월경 수원 농업과학기술원내의 망초에 서식하는 진딧물 (Dactynotus sp.)에서 발견하였다. 두 종은 Conidiobolus속 곰팡이의 전형적인 둥근모양의 1차포자를 형성하며 전반적으로 유사한 형태를 나타내었다. 하지만 C. obscurus의 1차포자 크기는 C. thromboides의 것보다 월등히 큰 것으로 나타났다. 또한 C. thromboides는 rhizoid를 형성하며 분생자병이 점차적으로 가늘어지나 C. obscurus는 rhizoid를 형성하지 못하며 일정한 금기의 분생자병을 만드는 것이 뚜렷한 차이점이었다.
경북지방에서 분리한 곤충병원성곰팡이 Beauveria bassiana와 Metarhizium anisopliae를 이용하여 나비목 해충인 거세미나방 (Agrotis segetum), 배추흰나비 (Artogeia rapae), 도둑나방 (Mamestra brassicae), 배추좀나방(Plutella xylostella), 파밤나방 (Spodoptera exigua), 담배거세미나방 (S. litura)의 생물적 방제 가능성을 알아보기 위하여 실험한 결과, 거세미나방 2$\cdot$3령충에 대하여 B. bassiana와 M. anisopliae의 반수치사농도 ($LC_50$)는 접종7일 후에 각각 $4.3\times10^6\;conidia/m\ell$와 $2.4\times10^5\;conidia/m\ell$였다. 배추흰나비 2$\cdot$3령충에 대한 B. bassiana와 M. anisopliae의 $LC_50$는 접종 7일 후에 각각 $1.2\times10^7\;conidia/m\ell$와 $5.2\times10^6\;conidia/m\ell$였다. 도둑나방 2$\cdot$3령충에 대한 B. bassiana와 M. anisopliae의 $LC_50$는 접종 7일 후에 각각 $1.5\times10^6\;conidia/m\ell$와 $9.7\times10^5\;conidia/m\ell$였고, 배추좀나방 2$\cdot$3령충에 대한 B. bassiana와 M. anisopliae의 $LC_50$는 각각 $3.0\times10^6\;conidia/m\ell$와 $1.4\times10^6\;conidia/m\ell$였다. 파밤나방 2$\cdot$3령충에 대한 B. bassiana와 M. anisopliae의 $LC_50$는 접종 7일 후에 각각 $6.3\times10^6\;conidia/m\ell$와 $2.6\times10^6\;conidia/m\ell$였고, 담배거세미나방 2$\cdot$3령충에 대한 B. bassiana와 M. anisopliae의 $LC_50$는 각각 $1.6\times10^7\;conidia/m\ell$와 $3.4\times10^6\;conidia/m\ell$였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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