새로운 methotrexate 중간체인 diethyl N-[4-{[(2,4-diamino-6-yl)methyl]-amino}benzoyl]-L-glutamate(10)를 합성하기 위하여 p-nitrobenzoic acid를 chlorination한 다음 L-glutamic acid와 coupling하고 이를 esterification한 후, 환원과 methylation시켜 diethyl N-(4-methylaminobenzoyl)-L-glutamate(7)를 합성하였다. 이 화합물(7)을 DMF 존재하에서 NaH와 allyl chloride를 가하여 allylation한 다음 여기에 $IN_3$ addition 반응으로 diethyl-p-[N-(2-azido-3-iodopropyl)-N-methyl]aminobenzoyl-L-glutamate(9)를 합성하였다. 이 화합물(9)을 2,4,5,6-tetraaminopyrimidine hydrochloride와 cyclization시켜 methotrexate diethylester를 얻었다.
Glutamate availability in the argF-argR-proB${\Delta}$ strain of Corynebacterium glutamicum was increased by addition of glutamate to the cell or inactivation of the phosphoenolpyruvate carboxykinase activity and simultaneous overexpression of the pyruvate carboxylase activity to assess its effect on L-ornithine production. When glutamate was increased in an L-ornithine-producing strain, the production of L-ornithine was not changed. This unexpected result indicated that the intracellular concentration and supply of glutamate is not a rate-limiting step for the L-ornithine production in an L-ornithine-producing strain of C. glutamicum. In contrast, overexpression of the L-ornithine biosynthesis genes (argCJBD) resulted in approximately 30% increase of L-ornithine production, from 12.73 to 16.49 mg/g (dry cell weight). These results implied that downstream reactions converting glutamate to L-ornithine, but not the availability of glutamate, is the rate-limiting step for elevating L-ornithine production in the argF-argR-proB${\Delta}$ strain of C. glutamicum.
초산으로 부터의 글루타민산 발효생성을 목적으로 Brevibacterium flavum nov. sp. D2209B 균주를 이용한 발효조건에 관하여 시험 검토한 결과는 다음과 같다. 1. 초산농도는 배지 l 당 30g 하일 때 L-GA생성이 좋았다. 2. KH$_2$PO$_4$, MgSO$_4$, FeCl$_3$, MnC1$_2$ 및 NaCl 등의 무기염류의 침가는 L-GA 생성을 위하여 필수적이며 이들 무기염의 농도차에 의한 현저한 영향은 볼 수 없었다. 3. Biotin의 농도는 l당 0.3r 이하의 한정된 범위에서 L-GA 생성이 가장 좋았다. 4. L-GA 생성을 위한 최적온도는 3$0^{\circ}C$이며 최적 pH는 7.5~8.5 였다 5. Succinic acid와 malic acid의 첨가로 L-GA 생성은 증가되었다. 6. 배양도중에 있어서의 penicillin 첨가는 L-GA생성을 촉진하며 발효 16시간째 배지 l당 20 unit를 첨가하였을 때 가장 효과적이였다. 7. 전배양시간은 16~20시간 배양이 가장 적당하였다.
Block copoly(L-lactide-${\gamma}$-benzyl-L-glutamate)was synthesized from L-lactide by cationic ring opening polymerization and ${\gamma}$-benzyl-L-glutamate N-carboxy anhydride by introducing amino group terminated poly(L-lactide). L-lactide was polymerized in the presence of stannous octate at $110^{\circ}C$ and ${\gamma}$-benzyl- L-glutamate was polymerized in the presence of NaH at room temperature. The synthesized monomers and copolymers were identified by IR and NMR. The Itermal properties of the copolymers were characterized by differential scanning calorimetry and thermogravimetry. The thermal stability and melting temperature(Tm) of the block copolymers were measured and discussed. The activation energies of thermal decomposition for the block copoly(L-lactide-${\gamma}$ benzyl-L-glutamate) were evaluated from the thermogravimetric data by Freeman and Carroll method.
Although it is known that neuronal cell death during development occurs by apoptosis, the mechanisms underlying excitatory amino acid-induced neuronal cell death remain poorly understood. In this study we have examined the mechanism by which L-glutamate, an excitatory amino acid neurotransmitter, induces cell death in PC12 cell lines. To characterize cell death, we employed sandwich enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) method for cellular DNA fragmentation, DNA agarose gel electrophoresis and chromatin staining by acridine orange and ethidium bromide after treating the PC12 cells with L-glutamate. L-Glutamate caused dose-dependent cell death with a maximum at 24 hrs after the treatment. These cellular fragmentation was blocked by pretreatment of MK-801, a noncompetitive N-methyl-D-aspartic acid(NMDA) receptor antagonist, and nerve growth factor(NGF). Analysis of DNA integrity from L-glutamate-treated cells revealed cleavage of DNA into regular sized fragments, a biochemical hallmark of apoptosis. The PC12 cells that were induced to die by L-glutamate treatment exhibited classical chromatin condensation under the light microscopy after acridine orange and ethidium bromide staining. These results suggest that apoptosis is one of the key features that are involved in L-glutamate-induced excitotoxic cell death in PC12 cells, and these cell death are mediated by NMDA receptor and depend on NGF.
L-Glutamate를 간편하고 단시간에 측정할 수 있는 glutamate sensor를 개발하기 위하여, glutamate oxidase를 여러 가지 membranes에 고정화 시키는데 적합한 조건과. 그 결과로 얻은 효소 membranes의 특성, 개발한 glutamate sensor의 반응특성 및 glutamate sensor의 정확성을 조사하였다. Glutamate oxidase를 membranes에 고정화 하는데 GA 0.25%, BSA 0.3 mg, 효소 사용량 2.0 units이상이 적당하였다. 고정화 효소의 최적 pH는 6.5이었고, chitosan membrane을 사상한 경우 가장 효소활성이 높았다. 그러나 저장 안정성이나 반응시간 등을 고려하여 preactivated nylon에 고정화시킨 효소 membrane을 glutamate sensor 개발에 사용하였다. Glutamate oxidase를 선택한 membrane에 고정화시켜 효소와 glutamate의 반응산물인 암모니아가 nonactin membrane을 이용한 암모니움이온 전극에 의하여 측정되도록 효소 sensor를 구성하였으며, sensor의 반응시간은 약 2분이었다. Preactivated membrane에 고정화된 효소는 $4^{circ}C$에서 2개월간 저장중 안정한 활성을 보였으며, 이를 사용한 glutamate sensor로 약 250회 측정할 때 까지 활성에 별 변화가 없었다, 개발된 glutamate sensor의 glutamate 측정 농도범위는 $0.1{\sim}5\;mM$ 이었다. Glutamate sensor를 체더 치즈중의 L-glutamate 측정에 응용한 결과는 HPLC로 분석한 결과와 높은 상관관계가 있어, 정확성이 인정되었다.
Biodegradability of poly $Poly({\gamma}-benzyl L-Glutamate)/poly(ethylene oxide)/Poly({\gamma}-benzyl L-Glutamate)$ block copolymer (GEG) having different content of poly(ethylene oxide) (PEO) were examined using magnetite as a tracer in mice. GEG microspheres containing magnetite were injected into mice through tail vein. Biodegradability and tissue distribution of microspheres were examined by analyzing the amount of magnetite in the microspheres recollected from mice organs after specific time interval. The results showed that GEG microsphere of high content of PEO was degraded more rapidly than those of low content of PEO in the mice organs.
The effect of Glutamate to myocardial toxicity induced by doxorubicin was studied with 20 male rats. 20 rats divided into 4 subgroups, 1st group was taken for normal control group without any treatment, 2nd group was injected with only doxorubicin, 3rd group was injected with L-glutamate and doxorubicin, and 4thd group was injected with only L-glutamate [all injections were done intraperitoneally]. Observations were made to each group on their gross findings, body weight, and electrocardiography, complete blood count and serum level of creatine phosphokinase. The results were as follows; l. In 1st group, we found no changes. 2. In 2nd group, there were many changes which were loss of body weight, dehydration, loss of body hair, diarrhea and death, in addition, elevation of CPK-MB isoenzyme and changes in EKG due to myocardial damage, leukopenia, thrombocytopenia were also found. 3. In 3rd group, there were more toxic effects containing 2 death cases, compared to 2nd group. 4. In 4th group, we found no specific changes except weight gain. These results suggest that L-glutamate which is intermediate of Krebs cycle may worsen the doxorubicin-induced myocardial toxicity.
Taurine (2-aminoethanesulfonic acid), one of bioactive amino acid in the mammalian brain, is known to exert inhibitory effects on neurons via GABA receptor. In the present study, we examined effects of taurine on glutamateinduced neurotoxicity on hippocampal neuron cell culture using cell counting method and lactate dehydrogenase (LDH) assay. After 10 d of culture, cells were stimulated with appropriate drugs. Only 43% of cultured neuronal cells survived at one day after stimulation with 500 uM L-glutamate for 10 min. Survival rate was enhanced by 82% in the presence of 10 mM taurine. LDH activity from the culture supernatant incubated with a combination of L-glutamate and taurine was less than half of that with L-glutamate alone. In the next series of experiments, interleukin-6 (IL-6) mRNA expression in cultured astrocytes was investigated using reverse tanscription-PCR (RT-PCR). IL-6 mRNA was detected in the astrocytes stimulated with L-glutamate in a dose-dependent manner, while not detected in the unstimulated control astrocytes. The expression of IL-6 mRNA caused by 10 mM glutamate was inhibited by taurine, but not by GABA. These findings demonstrated a neuroprotective action of taurine against glutamate-induced toxicity.
Kim, Seung-Cheol;Kim, Jin-Sook;Monoldorova, Sezim;Cho, Jang-Eun;Hong, Minsun;Jeon, Bo-Young
한국동물위생학회지
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제41권4호
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pp.239-244
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2018
Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) complex is the causative agent of tuberculosis (TB) in humans and bovine TB in mammalian hosts and grows very slowly. Selenium is a central molecule in nitrogen metabolism and an essential ingredient for all living cells and glutamic acid. The effects of selenium on the growth of M. tuberculosis, a representative slow-growing Mycobacterium species, were investigated and measured using the BacT Alert 3D System (MB/BacT System). Sodium selenate, at a final concentration of $10{\mu}g/mL$, reduced the average time-to detection (TTD) to 197.2 hours (95% confidence interval (CI), 179.6~214.8) from 225.1 hours (95% CI, 218~232.0) in the control culture media (P<0.05). The TTD did not increase with $\text\tiny{L}$-glutamate concentrations up to $10{\mu}g/mL$, but a significant reduction in the TTD was observed in the presence of $20{\mu}g/mL$${\text\tiny{L}}$-glutamate in culture media (P<0.05). In conclusion, selenate and ${\text\tiny{L}}$-glutamate enhance the growth of M. tuberculosis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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