• 대한약침학회지
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• 제10권2호통권23호
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• pp.73-79
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• 2007

Objectives : Tumor necrosis factor-${\alpha}{\cdot}$(TNF-${\alpha}{\cdot}$) is a proinflammatory cytokine involved in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. This study was designed to investigate the relation between TNF-${\alpha}{\cdot}$ gene polymorphism and rheumatoid arthritis in Korean population. Methods : This study was carried out on 103 rheumatoid arthritis patients who fulfilled the American College of Rheumatology 1987 revised criteria for rheumatoid arthritis and 208 healthy control subjects. Blood samples from all subjects were obtained for DNA extraction. The extracted DNA was amplified by polymerse chain reaction(PCR). PCR products were visualized by 2% agarose gel electrophoresis. We investigated the genotyping of TNF-${\alpha}{\cdot}$ by using Pyrosequencing. Results : The genotypes of TNF-${\alpha}{\cdot}$ gene were GG, AG and AA. While the distribution of TNF-${\alpha}{\cdot}$ polymorphism in control subjects was 92.31%, 7.21%, 0.48% respectively, in rheumatoid arthritis patients was 93.20%, 6.80%, 0.00%(GG, AG. AA). There was no statistical significant allelic frequency difference between control and rheumatoid arthritis groups. Conclusion : We concluded that there was no significant association between TNF-${\alpha}{\cdot}$ gene polymorphism and rheumatoid arthritis. However, the findings of this study need to be confirmed in more patients and further studies.

• Molecules and Cells
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• 제26권3호
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• pp.285-290
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• 2008

Estrogen-induced proliferation in estrogen receptor (ER)-positive breast cancer cells is primarily mediated through two distinct intracellular receptors, $ER{\alpha}$ and $ER{\beta}$. Although tumor necrosis factor alpha ($TNF{\alpha}$) and $E2/ER{\alpha}$ are known to exert opposing effects on cell proliferation in MCF-7 cells, the mechanism by which $TNF{\alpha}$ antagonizes $E2/ER{\alpha}$-mediated cell proliferation is not well understood. The present study suggests that reduced cell survival in response to $TNF{\alpha}$ treatment in MCF-7 cells may be associated with the down-regulation of $ER{\alpha}$ protein. The decrease in $ER{\alpha}$ protein level was accompanied by an inhibition of $ER{\alpha}$ gene transcription. Cell viability was decreased synergistically by the combined treatment with $ER{\alpha}$-siRNA and $TNF{\alpha}$. Furthermore, pretreatment of cells with the PI3-kinase (PI3K)/ Akt inhibitor, LY294002, markedly enhanced $TNF{\alpha}$-induced down-regulation of the $ER{\alpha}$ protein, suggesting that the PI3K/Akt pathway might be involved in control of the $ER{\alpha}$ level. Moreover, down-regulation of $ER{\alpha}$ by $TNF{\alpha}$ was not inhibited in cells that were pretreated with the proteasome inhibitors, MG132 and MG152, which suggests that proteasome-dependent proteolysis does not significantly influence $TNF{\alpha}$-induced down-regulation of $ER{\alpha}$ protein. In contrast, the effect of the PI3K/Akt inhibitor on $ER{\alpha}$ was blocked in cells that were treated with LY294002 in the presence of the proteasome inhibitors. Collectively, our findings show that the $TNF{\alpha}$ may partly regulate the growth of MCF-7 breast cancer cells through the down-regulation of $ER{\alpha}$ expression, which is primarily mediated by a PI3K/Akt signaling.

• Natural Product Sciences
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• 제23권3호
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• pp.201-207
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• 2017

Angelica decursiva has been utilised as remedy for controlling the airway inflammatory diseases in folk medicine. We investigated whether nodakenin, columbianadin, and umbelliferone isolated from the roots of Angelica decursiva inhibit the gene expression and production of MUC5AC mucin from human airway epithelial cells. Confluent NCI-H292 cells were pretreated with nodakenin, columbianadin or umbelliferone for 30 min and then stimulated with epidermal growth factor (EGF), phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) or tumor necrosis $factor-{\alpha}$ ($TNF-{\alpha}$) for 24 h. The MUC5AC mucin gene expression was measured by reverse transcription - polymerase chain reaction (RT-PCR). Production of MUC5AC mucin protein was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results were as follows: (1) Nodakenin did not affect the expression of MUC5AC mucin gene induced by EGF, PMA or $TNF-{\alpha}$. Columbianadin inhibited the expression of MUC5AC mucin gene induced by EGF or PMA. However, umbelliferone inhibited the expression of MUC5AC mucin gene induced by EGF, PMA or $TNF-{\alpha}$; (2) Nodakenin also did not affect the production of MUC5AC mucin protein induced by EGF, PMA or $TNF-{\alpha}$. Columbianadin inhibited the production of MUC5AC mucin protein induced by PMA. However, umbelliferone inhibited the production of MUC5AC mucin protein induced by EGF, PMA or $TNF-{\alpha}$. These results suggest that, among the three compounds investigated, umbelliferone only inhibits the gene expression and production of MUC5AC mucin stimulated by various inducers, by directly acting on airway epithelial cells, and the results might explain the traditional use of Angelica decursiva as remedy for diverse inflammatory pulmonary diseases.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제44권6호
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• pp.1353-1365
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• 1997

연구배경 : 종양괴사인자(tumor necrosis factor ; TNF)는 다양한 생물학적 기능을 가지고 있는 바, 그 중 생체 외에서 증명된 뚜렷한 항암 효과로 말미암아 최근 항암 유전자요법의 중요한 대상으로 관심을 모으고 있다. 현재 유전자 이입의 기술적 문제로 생체 외에서 암세포에 유전자 이입을 시행한 후 이를 다시 환자의 생체내로 이식하는 방법이 연구의 주종을 이루고 있다. 그러나 저자들의 과거의 연구를 포함한 여러 연구에서 TNF가 이입된 암세포는 TNF에 대해 내성을 보이는 이에는 새로이 방어 단백질을 합성하는 것이 관여할 것이라는 시사가 있었다. 이 획득내성의 기전을 밝히는 것이 종양생물학의 이해를 넓히고 보다 효과적인 항암 유전자요법을 개발하기위한 매우 중요한 과제로 생각된다. 저자들은 TNF 유전자 이입에 따른 암세포의 TNF에 대한 획득내성에, 일부 세포에서 TNF에 의해 발현이 유도된다는 것이 밝혀진, 항산화효소의 하나인 MnSOD의 발현의 변화가 관여하는 지를 규명하고자 본 실험을 수행하였다. 방 법 : TNF에 다양한 감수성을 보이는 인체 및 생쥐 기원의 4가지 암세포주(WEHI164, NCI-H2058, A549, ME180)에 TNF-$\alpha$ 유전자를 retroviral 이용하여 이입하고 TNF의 발현을 시도하여 PCR, ELISA, MTT assay로 확인하였고, TNF 유전자가 이입된 세포(WEHI164-TNF, NCI-H2058-TNF, A549-TNF, ME180-TNF)는 TNF에 내성을 보이는지 역시 MTT assay로 검증하였다. TNF 유전자 이입 전후의 MnSOD mRNA 발현의 차이는 Northern blot analysis를 통하여 비교하였다. 결 과 : 1) TNF-$\alpha$ 유천자 이입 및 발현 확인 PCR을 시행한 결과 TNF 유전자가 이입된 각 세포 790 base pair 표기의 진한 DNA band를 보인 반면 모세포주는 보이지 않아서 retroviral vector를 이용한 유전자 이입이 DNA 수준에서 이루어 있었다. 그리고 TNF 유전자가 이입된 세포의 배양상층액에서 TNF양을 ELISA로 측정한 결과 TNF를 세포에 따라 1.91ng/24hr/$10^6\;cells$에서 3.91ng/24hr/$10^6\;cells$ 생산함을 알 수 있었다. 2) TNF 유전자 이입 전후, 암세포의 TNF에 대한 감수성 비교 TNF 농도 100ng/ml에서 WEHI164-TNF와 ME180-TNF 세포는 통계적으로 유의하게 (p<0.01) TNF에 대한 내성을 획득함을 알 수 있었다. 3) TNF 유전자 이입 전후외 MnSOD mRNA 발현양상 TNF에 감수성을 보이는 WEHl164와 ME180세포는 TNF 유전자 이입 후에 MnSOD mRNA 발현이 증가되지 않았으며, TNF에 내성을 보이는 NCIH2058과 A549 세포는 TNF 유전자 이입 후에 MnSOD mRNA 발현의 증가가 관찰되었으나 이는 모세포에 외부에서 TNF를 주었을 때도 관찰되었다. 결 론 : 세포주에 TNF 유전자를 이입하여 TNF를 발현하게 하였을때 세포 자신은 TNF에 대해 내성을 하게 되는데, 이 획득내성은 MnSOD 발현 능력의 향상에 의한 것은 아닐 것으로 판단되나 각 세포주의 자연 상태의 TNF에 대한 감수성 여부는 MnSOD의 발현 차이가 관련될 것으로 생각된다.

• 대한한방내과학회지
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• 제30권4호
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• pp.685-695
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• 2009

Objectives : In this study, the author tried to investigate whether Geonpye-tang(GPT) significantly affects PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production and gene expression from human airway epithelial cells. Materials and Methods : Effects of the agent on PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production and gene expression from human airway epithelial cells (NCI-H292) were investigated. Confluent NCI-H292 cells were pretreated for 30 min in the presence of GPT and treated with PMA (10ng/ml) or EGF (25ng/ml) or TNF-alpha (0.2nM), to assess both effect of the agent on PMA- or EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and gene expression by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Possible cytotoxicity of the agent was assessed by examining the rate of survival and proliferation of NCI-H292 cells after treatment with the agent over 72 hrs (SRB assay). Results : (1) GPT significantly inhibited PMA-induced and EGF-induced MUC5AC mucin production from NCI-H292 cells. However, GPT did not affect TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production. (2) GPT significantly inhibited the expression levels of PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC genes in NCI-H292 cells (3) GPT did not show significant cytotoxicity to NCI-H292 cells. Conclusion : This result suggests that GPT can affect the production and gene expression of respiratory mucin observed in diverse respiratory diseases accompanied by mucus hypersecretion. This can explain the traditional use of GPT in oriental medicine. Effects of GPT with their components should be further investigated using animal experimental models that reflect pathophysiology of airway diseases through future studies.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제22권6호
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• pp.525-531
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• 2014

In the present study, we investigated whether apigenin significantly affects tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$)-induced production and gene expression of MUC5AC mucin in airway epithelial cells. Confluent NCI-H292 cells were pretreated with apigenin for 30 min and then stimulated with TNF-${\alpha}$ for 24 h or the indicated periods. The MUC5AC mucin gene expression and mucin protein production were measured by reverse transcription - polymerase chain reaction (RT-PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), respectively. Apigenin significantly inhibited MUC5AC mucin production and down-regulated MUC5AC gene expression induced by TNF-${\alpha}$ in NCI-H292 cells. To elucidate the action mechanism of apigenin, effect of apigenin on TNF-${\alpha}$-induced nuclear factor kappa B (NF-${\kappa}B$) signaling pathway was also investigated by western blot analysis. Apigenin inhibited NF-${\kappa}B$ activation induced by TNF-${\alpha}$. Inhibition of inhibitory kappa B kinase (IKK) by apigenin led to the suppression of inhibitory kappa B alpha ($I{\kappa}B{\alpha}$) phosphorylation and degradation, p65 nuclear translocation. This, in turn, led to the down-regulation of MUC5AC protein production in NCI-H292 cells. Apigenin also has an influence on upstream signaling of IKK because it inhibited the expression of adaptor protein, receptor interacting protein 1 (RIP1). These results suggest that apigenin can regulate the production and gene expression of mucin through regulating NF-${\kappa}B$ signaling pathway in airway epithelial cells.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제48권8호
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• pp.871-876
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• 2005

목 적 : 한국 소아 1형 당뇨병에서 TNF promoter -857T/C와 -1031C/T 및 $LT-{\alpha}$ 유전자 다형성과 질병감수성과의 관련성을 평가하고자 하였다. 방 법 : 1형 당뇨병으로 진단 받은 소아 49명(여아 29명, 남아 20명)과 정상 대조군 94명의 혈액을 채취하여 DNA를 추출하였다. 추출한 DNA에 대하여 allele-specific PCR법을 이용하여 TNF promotor -1031C/T 다형성을, PCR-RFLP법을 이용하여 TNF promotor -857T/C, $LT-{\alpha}$ 유전자 다형성을 분석하였다. 결 과 : 환자군과 대조군 사이에서 TNF promoter -857T/C, -1031C/T 다형성의 분포는 차이가 없었다. 환자들의 임상적 특징에 따라 아군(subgroup)으로 분류하였을 때, 진단 시 당뇨병성 케톤산혈증으로 발현한 환자들에서 TNF promoter -1031C/T 다형성의 TT 유전자형의 빈도가 당뇨병성 케톤산혈증으로 발현하지 않은 환자들과 비교하여 유의하게 낮았다(P<0.05). 다른 임상적 특성들과 이들 유전자 다형성 사이에는 관련성이 없었다. 또 환자와 대조군 사이에 $LT-{\alpha}$ 유전자 다형성의 분포는 차이가 없었으며, 임상적 특성과의 관련성도 없었다. 결 론 : 이 연구를 통하여 TNF promoter -857T/C, $LT-{\alpha}$ 유전자 다형성이 한국 소아에서 1형 당뇨병의 질병감수성과 관련이 없음을 알 수 있었다. 그러나 TNF promoter -1031C/T 다형성은 당뇨병성 케톤산혈증과 같은 1형 당뇨병의 특정 임상양상에 영향을 미칠 수 있는 유전적 인자로 생각된다.

• Childhood Kidney Diseases
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• 제8권1호
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• pp.1-9
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• 2004

목 적 : 미세변화신증후군은 소아의 원발성 신증후군의 주요 원인질환이다. 미세변화증후군의 정확한 병인기전은 아직까지 알려져 있지 않으나, 최근 $TNF-{\alpha}$가 이 질환의 병인기전과 관련된다는 보고가 있었다. 이에 저자들은 환아의 혈청과 요에서 $TNF-{\alpha}$의 변화를 살펴보고, $TNF-{\alpha}$가 이 질환의 표적세포인 토리 상피세포에 미치는 직접적인 영향을 알아보고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 2-15세의 미세변화신증후군 환아에게서 혈청과 요에서 $TNF-{\alpha}$치를 측정하였고, 토리 상피세포로 도포된 Millicell system을 사용하여 $TNF-{\alpha}$가 토리 상피세포에 의하여 형성되는 투과성에 미치는 영향을 알아보았다. 또한 $TNF-{\alpha}$가 토리 상피세포에서 생성되어 토리 기저막의 투과성을 결정하는 물질인 heparan sulfate proteoglycan의 유전자 발현과 생성에 미치는 영향을 측정하였다. 결 과 : 미세변화신증후군의 재발시 요중 $TNF-{\alpha}$치 (ng/mg cr)는 $364.4{\pm}51.2$로서 관해와 대조군의 $155.3{\pm}20.8$과 $36.0{\pm}4.5$에 비하여 유의하게 증가되어 있었다 (P<0.05). 그러나 $TNF-{\alpha}$가 토리 상피세포의 투과성 검사와 토리 상피세포의 heparan sulfate proteoglycan의 유전자 발현과 생성에 아무런 영향을 미치지 않았다. 결 론 : $TNF-{\alpha}$는 토리 상피세포에 직접적인 영향을 미치지 않으므로 미세변화신증후군에서의 요중 $TNF-{\alpha}$치의 증가는 질병으로 인한 이차적인 변화일 것으로 생각된다.

• 대한한의학회지
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• 제26권1호
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• pp.59-70
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• 2005

Objective: Tumor necrosis factor-a $(TNF-{\alpha})$, a potent immuno-modulator and pro-inflammatory cytokine, has been implicated in many pathological processes. In this study, the author examined whether promoter region polymorphism in the $TNF-{\alpha}$a gene at position-308 affect the odds of cerebral infarction (CI) and whether genetic risk is enhanced by sasang constitutional classification. Methods: 212 CI patients and 610 healthy controls were genotyped and determined according to sasang constitutional classification. The amplified genotypes were analyzed on $8\%$ polyacrylamide gel. The alleles were visualized by ethidium bromide staining. Primers for $TNF-{\alpha}$ were designed to incorporate a polymorphic site at a position -308 bp of the $TNF-{\alpha}$ gene into an NcoI restriction site. Restriction digests generated products of 87 and 20 bp for G allele and 107 bp for A allele. Results : A significant decrease was found for the $TNF-{\alpha}$ A allele in CI patients compared with controls (P=0.033, odds ratio, O.R.: 0.622). However, there was no significant association between $TNF-{\alpha}$ polymorphism and sasang constitution in CI patients. Conclusion: My finding suggests that $TNF-{\alpha}$promoter region polymorphism is responsible for susceptibility to CI in Koreans.

• Journal of Acupuncture Research
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• 제21권2호
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• pp.89-101
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• 2004

홍채학은 대체의학의 한 분야로서 홍채 침착의 불규칙성을 주시함으로써 의학적 상태를 진단한다. 홍채학적 분류에 의한 체질은 가족력을 보이고 있으며 이는 홍채체질의 유전성을 의미한다. 강력한 면역조절자이며 전 염증성 사이토카인인 종양괴사인자(tumor necrosis factor-a, TNF-${\alpha}$)는 많은 병리적 과정에서 중요한 역할을 한다. 따라서 본 연구자는 고혈압환자에서 홍채체질과 TNF-${\alpha}$ 유전자 다형성과의 관련성을 조사하였다. 87명의 고혈압 환자와 79명의 정상인을 홍채체질에 따라 분류하였으며 이들의 TNF-${\alpha}$ 유전자형을 분석하였다. 결과적으로 정상인에 비하여 TNF-${\alpha}$ GA 이형접합체의 빈도가 고혈압 환자군에서 감소하였다. 이 같은 결과는 TNF-${\alpha}$ 다형성이 고혈압에 대한 저항성과 관련 있음을 의미한다. 또한 고혈압환자에서 콜레스테롤 침착체질과 심신 결합조직 허약 체질은 42.5%로서 정상인 16.5%에 비하여 현저하게 증가하였다 (P<0.001). GG TNF-${\alpha}$ 유전자형을 갖고 있는 군에서 심신 결합조직 허약체질과 콜레스테롤 침착체질의 빈도는 정상인보다 환자에서 유의하게 높았다(P<0.001). 본 연구에서 저자는 홍채체질과 고혈압사이의 관련성을 발견함과 동시에 TNF-${\alpha}$ 유전자 다형성과 고혈압, 그리고 홍채 체질과의 관련성을 최초로 입증하였다.