Effects of water extract of aloe vera on lead-induced neurotoxicity were investigated in sciatic nerve isolated from rat. The mechanism on toxicity reduction by measuring activities of axonal enzymes, metabolism of myo-inositol in nerve, lead concentration in several organs and so on were further examimed. In the lead-treated rats, the transport rate of axonal enzyme, such as acetyl cholinesterase and choline acetyltransferase, was reduced by from 50% to 30% respectively. Reduction in myo-inositol concentration and $Na^+/K^+$ ATPase activity were also observed in sciatic nerve from lead-treated rat. However, the aloe extract administration significantly eliminated the impairment and maintained myo-inositol concentration to about 85% of normal level. Also aloe extract promoted the excretion rate of lead which is accumulated in blood, sciatic nerve and kidney. These results suggest that lead-induced neurotoxicity was significantly reduced by administration of aloe extract and the mechanism might be partly increase in kidney excretion rate of lead and parity normalization of $Na^+/K^+$ ATPase activity which is critical factor in order to keep nerve maintaining normal myo-inositol level.
Background The stenosis of the coronary artery may decrease myocardial oxygen supply and occur myocardial ischemia or infarction. Soojeomsan, one of analgesics is generally regarded to have the effect of vitalizing blood, expelling blood stasis and alleviation cardiac pain. Methods The purpose of this experimental study is to find the influence of Soojeomsan on cardiac enzyme (CPK, Na-K ATPase) of ischemic and reperfused rat hearts which are isolated under the Langendorff apparatus. Ischemia was induced In isolated hearts of Sprague-Dawley rats by ceasing the perfusion for 20 minutes. The experiments were divided into a normal saline orally administered group(control group), a Soojeomsan orally 20ml administered group(sample A) and a Soojeomsan orally 30ml administered group(sample B). The CPK (creatinine phosphokinase) and Na-K ATPase activity of this three group were measured and compared in order to assess the influence of Soojeomsan on protection of isolated rat hearts from ischemia. Results 1. CPK was significantly reduced in Sample A group and Sample B group in comparison with control group in reperfusion(P<0.01), and there were no significant difference between Sample A and B. 2. Na-K ATPase activity was significantly increased in Sample A group and Sample B group in comparison with control group in ischemia(P<0.001), and the activity was significantly higher in Sample B then in Sample A.(P<0.01) 3. There were no significant difference in Na-K ATPase activity of the three groups after reperfusion. Conclusion Soojeomsan has effects to decrease CPK activity and activate Na pump. This result in protection of the myocardium of isolated rat hearts from ischemia.
Four known cardiotonic steroids were isolated from roots of Adonis amurensis Regel et Radde and identified as digitoxigenin, cymarin, K-strophanthin and convallatoxin by chromatography on Amberlite XAD-2 resin and silica gel, high performance liquid chromatography and gel chromatography on Sephadex LH-20. In order to clarify the structure-activity relationship, thirteen related compounds of digitoxigenin were tested for the inhibitory activities for $Na^+,\;K^+$-adenosine triphosphatase from guinea pig heart. The inhibitory activities of related compounds of digitoxigenin were dependent upon the dicarboxylic acid and amino acid components. The compound having both the arginine and suberic acid moiety showed the higher inhibitory activity. The sulfate and glucuronide of digitoxigenin exhibited much less potency than the parent genin.
고혈압백서(1-kidney, 1-clip-hypertensive rat)의 적혈구에서 노화 과정에 따른 Na, K-ATPase의 변동을 관찰하고저 노화적혈구를 분리한다음 세포막에서의 Na-pump 활성도 및 ouabain의 결합실험과 Rb의 세포내 유입실험을 시행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 본 실험에 사용한 고혈압 백서의 혈압은 수축기 및 이완기 혈압이 165.5/119.0 mmHg로 유의하게 증가 하였다. 노화 적혈구의 평균용적(MCV)과 세포막 단백질 함량은 감소되고 혈색소치는 증가되었다. 2. 110 mM NaCl 및 10 mM KCI 존재하에서의 적혈구 세포막 Na, K-ATPase활성도는 대조군에 비해 고혈압군에서 억제 되었으며 양군 모두에서 노화에 의해 그활성도가 감소되었다. 3. 4 mM RbCl존재하에서 Ouabain에 의해 억제되는 Rb의 유입은 정상 및 고혈압군의 노화적혈구에서 약간 감소되었으며 고혈압군의 young erythrocyte에서는 오히려 약간 증가 되었다. 4. 16 mM RbCl 존재하에서 Ouabain에 의해 억제되는 Rb의 유입은 양군의 노화 적혈구에 서는 각군의 young erythrocyte에 비해 약 30-50% 감소되었으며, 고혈압군에서는 특히 young erythrocyte에서 정상군의 young erythrocyte에 비해 유의하게 감소되었다. 5. $0.13{\times}10^{-6}M$과 $1{\times}10^{-6}M$에서의 ouabain binding은 정상군의 노화적혈구에서는 young erythrocyte에 비해 약간 감소되었으나 고혈압군의 노화적혈구에서는 유의하게 감소되었다. 6. $6{\times}10^-6}M$과 $64{\times}10^-6M$ 에서의 ouabain binding은 양군의 노화 적혈구에서는 약간 감소되었지만 유의성은 없었으며 고혈압군의 young erythrocyte 및 노화적혈구에서는 정상군의 young erythrocyte및 노화 적혈구에 비해 유의하게 감소되었다. 이상의 결과로부터 (1) 고혈압쥐의 young erythrocyte에서는 low affinity의 Na-pump수의 감소및 molecular activity의 증가, (2) 정상쥐의 노화 적혈구에서는 molecular activity의 저하, (3) 고혈압쥐의 노화적혈구에서는 molecular activity의 저하 및 high affinity와 low affinity의 Na-pump수의 저하등에 의하여 Na-pump의 기능이 변동될 수 있을 것으로 추측된다.
중추신경계의 혈관폐쇄 또는 충격손상에 의한 허혈병소에서 진행되는 병리적 변화에 산소유리라디칼이 중요한 역할을 할 것으로 시사되고 있다. 저자는 산소유리라디칼이 뇌조직에 미치는 영향 중 특히 신경세포 정지막전위 유지에 중요한 $Na^+-K^+-ATPase$의 활성도에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 산틴산화효소 반응계와 뇌조직미크로좀을 이용하여 본 연구를 시행하였다. 미크로좀분획(microsomal fraction)을 산틴과 산틴산화효소와 함께 반응시켰을 때, 분획의 $Na^+-K^+-ATPase$의 활성도는 현저한 불활성화를 보인 반면, $Mg^{++}-ATPase$의 활성도는 별로 영향을 받지 않았다. 이 불활성화는 산틴과 신틴산화효소 중 어느 한 물질이라도 반응계에 존재하지 않는 경우에는 나타나지 않았고, 두 물질이 같이 반응계에 존재할 때 나타났다. 산틴과 산틴산화효소의 반응에서 생성되는 산소유리라디칼들 중, 어떤 것이 $Na^+-K^+-ATPase$불활성화에 관계하고 있는가를 알아보기 위하여, 산수유리라디칼 각각에 대하여 제독작용을 가진 효소나 화학물질을 사용하여 불활성화의 저해유무를 관찰하였다. $O_{\bar{2}}{\cdot}$의 제독효소인 superoxide dismutase, $H_2O_2$의 제독효소인 catalase와 $^1O_2$의 제독물질인 1,4-diazabixyclo(2,2,2)octane을 각각 사용하였을 때, 이들 물질들이 농도에 비례하여 $Na^+-K^+-ATPase$의 불활성화가 저해되었다. 그러나 $OH{\cdot}$의 제독물질인 mannitol은 뚜렷한 효과를 보이지 못했다. 이상의 결과는 산소유리라디칼들 중 $O_{\bar{2}}{\cdot},\;H_2O_2$ 및 $^1O_2$가 $Na^+-K^+-ATPase$의 불활성화에 관계하고 있고, $OH{\cdot}$는 거의 관계하지 않는다는 것을 시사하여 주었다. 이로 미루어, 산소유리라디칼에 의한 뇌조직 $Na^+-K^+-ATPase$의 불활성화는 뇌 허혈병소에서 관찰되는 신경세로의 기능적 장해를 유발시키는 한 요인으로 사료되었다.
Endosomes lower their internal pH by an ATP-driven proton pump, which is critical to dissociation of many receptor-ligand complexes, the first step in the intracellular sorting of internalized receptors and ligands. Endosomes are known to exhibit n great range of pH values that can vary between 5.0 and 7.0 within a single cell although the factors that regulate endosomal pH remain uncertain. To evaluate the morphological and topological differences of endosomes in the different stages, confocal microscopy was used. The early endosomes labeled with fluorescein isothiocyanate-dextran for 10 min at $37^{\circ}C$ were identifiable at the peripheral and tubule-vesicular endosome compartment. In contrast, the late endosomes formed by 10 min pulse and 20 min trace were located deeper in the cytoplasm and showed more vesicular features than early endosomes. For the purpose of determining whether ATP-dependent acidification was heterogeneous and whether the differences in acidification were attributed to differences in the activity of $Na^{+}-K^{+}$-ATPase and/or $Cl^{-}$ channel, endocytic compartments were fractionated into subpopulation using percoll gradient and measured ATP-dependent acidification. While all fractions exhibited ATP-dependent acidification activity, both the initial rate of acidification and extent of proton translocation were lower in early endosomes and gradually increased in late endosomes. Phosphorylation by PKA and ATP enhanced ATP-dependent acidification in both early and late endosomes, hut there was no difference in the degree of enhancement by phosphorylation between two subpopulations. When ATP-dependent acidification was determined in the presence or absence of vanadate ($Na_{3}VO_{4}$) or ouabain, only early endosomes exhibited the vanadate or ouabain dependent stimulation of acidification activity, suggesting the inhibition of $Na^{+}-K^{+}$-ATPase. Therefore, it seems probable that the inhibition of early endosome acidification by $Na^{+}-K^{+}$-ATPase observed in vitro at least in part plays a physiological role in controlling the acidification of early endosomes in vivo.
Vanadate가 가토 신피질절편에서 PAH이동과 Na-K-ATPase활성에 미치는 효과를 관찰한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1) Vanadate는 Na-K-ATPase활성을 농도에 따라 억제하였으며 $7.94{\times}10^{-7}M$에서 이 효소의 활성이 50% 억제되었다. 2) Vanadate는 PAH의 능동적이동을 농도에 따라 억제하였으며 50%억제농도는 대략 $10^{-4}M$ 이었고, 수동적이동에는 영향을 미치지 못하였다. 조직내 Na과 K의 양도 vanadate가 PAH이동을 억제하는 농도 범위에서 같이 변화하였고 산소소모량은 $10^{-4}M$까지는 약간 감소하였으나 $10^{-3}M$에서는 오히려 증가하였다. 3) 30분간 preincubation한 후에도 15분까지의 PAH이동은 30분 이후에 비해 vanadate에 의해 적게 억제되었다. 4) $10^{-4}M$ vanadate와 $10^{-4}M$ ouabain은 가역적으로 PAH 이동을 억제하였으며 $10^{-3}M$ vanadate는 비가역적으로 억제하였고 장시간 세척후에도 거의 같은 정도의 억제양상을 나타내었다. 5) Vanadate에 의한 PAH이동의 억제정도는 incubation용액내 $Na^+$의 감소, $K^+$의 증가에 의하여 증가하였고 $Ca^{2+}$의 농도 변화에 의해서는 영향을 받지 않았다. 6) Vanadate가 존재치 않을 때 Tris완충용액 사용시는 pH 8.2까지 PAH축적정도가 증가하였고 phosphate완충용액 사용시는 pH 7.4에서 최대축적치를 보였다. pH가 증가함에 따라 억제정도는 증가하였으며 같은 pH에서도 완충용액의 종류에 따라 vanadate에 의한 억제정도가 달랐다. 7) Vanadate와 ouabain은 PAH이등과 Na-K-ATPase활성에 부가적 억제작용을 나타내었다. 이상의 결과로 vanadate는 가토신장의 세포내부에서 Na-K-ATPase를 가역적으로 억제함으로써 PAH의 이동을 억제하는 것으로 생각되며 PAH의 이동은 Na-K-ATPase활성과 기능적으로 밀접히 연결되어 있는 것으로 생각된다.
체중 100g 내외의 Sprague Dawley계 정상백서 암, 수 각 50마리씩을 실험동물로 하여 분말형태의 순수 DMBA를 소구(pellet)로 압착제작하여 우측 악하선에 매식후 즉시, 1,3,5,7,9,11,13,15,17주째 10마리씩 희생시켜 좌, 우측악하선을 적출, 무게를 측정하고, 육안적, 조직학적, 생화학적으로 실험기간에 따라 비교분석하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 매식후 11 주째부터 우측 경부 악하선부위의 종창을 관찰할 수 있었으며, 결절덩어리를 촉진할 수 있었다. 2. 우측악하선의 무게의 크기는 실험기간의 경과에 따라 괄목할만한 증가를 보였다(매식후 17주째는 좌측에 비해 약 5.5배의 무게를 나타냈다). 3. 매식후 7주와 11주째부터 조직학적으로 상피이형성과 침윤성 유표피암의 소견을 각각 관찰할 수 있었다. 4. 우측 악하선에서의 유표피암의 발생율은 매식후 17주째 76%이었다. 5. DMBA 는 현저히 억제된 $Na^+,K^+$-ATPase 활성도를 야기하며 실험기간의 경과의 따라 활성도 비율도 현저히 저하시킨다.
토마토의 뿌리조직에 존재하는 여러 가지 이온이동 기작을 밝혀내기 위하여 뿌리조직으로부터 마이크로솜을 분리하였고, 마이크로솜에 존재하는 이온점프(ATPase)의 활성을 측정하였다. 원형질막과 액포막에 위치하는 $H^+-ATPase$들의 활성은 각각의 선택적 저해제인 vanadate와 $NO^-_3$를 이용하여 평가하였고, 이들의 활성은 각각 마이크로솜 ATPase 총활성의 ${\sim}30%$, ${\sim}38%$로 나타났다. 이들 두 가지 저해제 효과는 additive하게 나타났으며, 전체활성의 약 $50{\sim}70%$를 저해함을 확인하였다. 마이크로솜 ATPase활성은 pH의 영향을 받으며, 최대 활성은 pH 7.4에서 나타났다. ATPase 활성은 또한 10 mM 이상의 $K^+$에 의해서 약 30% 증가를 보였으며, $K^+$에 의한 활성촉진 효과는 $Na^+$에 의해서 완전히 저해되었다. $K^+$에 의한 ATPase 활성증가 기작을 조사하기 위해, 반응용액의 $K^+$농도를 조절하면서 선택적 저해제들의 효과를 측정하였다. 반응용액에 $K^+$이 없는 조건과 120mM $K^+$을 함유하는 조건에서 vanadate는 ATPase 활성을 동일하게 27% 저해하였으나, $NO^-_3$는 각각의 조건에서 32%, 40% 저해하였다. 이것은 $NO^-_3$에 민감한 액포막의 $H^+-ATPase$활성이 $K^+$에 의해서 촉진된다는 것을 시사한다. 마이크로솜 ATPase 활성은 $Ca^{2+}$에 의해서도 저해되었으며, $NO^-_3$는 $Ca^{2+}$에 의한 저해효과를 억제하였다. 이상의 결과는 토마토 뿌리조직의 마이크로솜 ATPase중 액포막의 $H^+-ATPase$ 활성이 $K^+$에 의해서 증가하며, $Ca^{2+}$에 의해서 저해되는 것을 보여준다.
1. 표고버섯의 미토콘드리아는 설탕 농도 $44{\sim}50%$ 사이에서 분리정제 되었다. 2. 파장 변화에 따른 미토콘드리아성 ATPase의 비활성도는 680 nm파장에서 가장 증가하였다. 3. 680nm에서 빛 조사 시간 변화에 따른 활성도는 5분 동안 조사하였을 때 가장 증가하였다. 4. 최적 광조건(680nm, 5분)에서 조사한 이 효소의 최적 pH 및 최적 온도는 7.5와 $59^{\circ}C$였다. 5. 최적 광조건에서 얻은 이 효소는 $Fe^{3+},\;Fe^{2+},\;Mg^{2+},\;K^+$ 및 $Ca^{2+}$ 이온에 의하여 활성화되었고, $Na^+$ 이온에 의하여 억제되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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