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Human Liver로부터 Cloning한 cDNA성장호르몬 수용체의 기능성 검토 (Assembly of a Functional cDNA for Human Liver Growth Hormone Receptor: Cloning of Assembled hGHR cDNA)

  • 장규태;지선병홍;손동수;서원진삼;고교적웅
    • 한국수정란이식학회지
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    • 제13권2호
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    • pp.159-172
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    • 1998
  • 사람 성장호르몬 수용체(hGHR) cDNA는 PCR방법에 의하여 fagment로서 보고되어진 바 있으나, liver cDNA로 부터 전장을 cloning한 보고는 없는 실정으로 본 연구에서는 기능을 가진 약 4.6kbp의 cDNA hGHR을 cloning 하는데 성공하였다. 먼저 cloning하기 위하여 human liver mRNA와 human breast cancer tissue로부터 회수한 mRNA를 RT-PCR방법에 의하여 human cDNA library와 cloning에 필요한 probe를 제작하였다. human library mRNA는 GT-PCR방법에 의하여 증폭하여 증폭되어진 산물은 λZAP Vector를 이용하여 cDNA library를 구축하였고,screeing을 위하여 임 보고 되어진 hGHR fragment native sequence를 기초로 N-terminal부분의 primer를 설계하여 950bp의 probe를 얻는데 성공하였다. 이 probe를 이용하여 준비된 human liver cDNA library로부터 2.5$\times$10 6개의 plaque로부터 6개의 positive clone을 획득하였고, 이들중 poly Asignal인 "AATAAA"를 포함하고 있는 가장 긴 약 3.8kbp의 clone을 sequencing한 결과 open reading frame을 포함하고 있었으나, 5'부분의 결손되어 있었다. 그리하여 이 부분은 human breast cancer tissue로 부터 회수한 mRNA를 RT-PCR에 의하여 증폭하였고, sequencing결과 이미 보고되어진 native hGHR와 비교한 결과 하나의 nucleotide가 silent mutation으로 판명되었다.한편 human liver cDNA library로부터 cloning한 3.8cp의 positive clone의 5'end의 결손된 부분에 silent mutation된 PCR 산물을 연결함으로써 native hGHR와 유사한 cDNA hGHR subcloning에 성공하였다. 이러한 cDNA hGHR의 clone이 function을 가지고 있는지를 검토하기 위하여 eukaryotic 발현 vector인 pCXN2에 의거 ligation한 후 chinese hamster ovary cell[CHO-KI]에 transfect를 실시하였다. Dexamethasone은 첨가하지 않고 hGH만의 존재하에서 이들 cell을 배양시키고 cell menbrane에서 발현 여부를 판정키 위하여 hGHR monocloual antibody를 사용하여 flow cytometery해석을 실시하는 한편 125I-hGH binding assay에 의하여 hGH binding activity를 측정하였다. 최종적으로 GH signal transduction의 target genedf으로 알려져 있는 serine protease inhibitor 2.1(Spi 2.1) gene의 promotor activity를 검토한 결과 hGHR을 transfect한 CHO Cell에 있어서 hGH의 농도에 의존적으로 증가되었다. 따라서 본 실험에서 cloning한 cDNA hGHR는 native hGHR와 같은 기능을 가지는 것으로 판명되었다.것으로 판명되었다.

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Effective Exon-Intron Structure Verification of a 1-Pyrroline-5-Carboxylate-Synthetase Gene from Halophytic Leymus chinensis (Trin.) Based on PCR, DNA Sequencing, and Alignment

  • Sun, Yan-Lin;Hong, Soon-Kwan
    • 한국자원식물학회지
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    • 제23권6호
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    • pp.526-534
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    • 2010
  • Genomes of clusters of related eukaryotes are now being sequenced at an increasing rate. In this paper, we developed an accurate, low-cost method for annotation of gene prediction and exon-intron structure. The gene prediction was adapted for delta 1-pyrroline-5-carboxylate-synthetase (p5cs) gene from China wild-type of the halophytic Leymus chinensis (Trin.), naturally adapted to highly-alkali soils. Due to complex adaptive mechanisms in halophytes, more attentions are being paid on the regulatory elements of stress adaptation in halophytes. P5CS encodes delta 1-pyrroline-5-carboxylate-synthetase, a key regulatory enzyme involved in the biosynthesis of proline, that has direct correlation with proline accumulation in vivo and positive relationship with stress tolerance. Using analysis of reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and PCR, and direct sequencing, 1076 base pairs (bp) of cDNA in length and 2396 bp of genomic DNA in length were obtained from direct sequencing results. Through gene prediction and exon-intron structure verification, the full-length of cDNA sequence was divided into eight parts, with seven parts of intron insertion. The average lengths of determinated coding regions and non-coding regions were 154.17 bp and 188.57 bp, respectively. Nearly all splice sites displayed GT as the donor sites at the 5' end of intron region, and 71.43% displayed AG as the acceptor sites at the 3' end of intron region. We conclude that this method is a cost-effective way for obtaining an experimentally verified genome annotation.

발전용 천연가스-디젤 혼소 엔진의 흡기밸브 개폐시기에 따른 연소 및 배출 특성에 대한 수치 해석적 연구 (Numerical study on effect of intake valve timing on characteristics of combustion and emission of Natural gas-Diesel engine)

  • 정재환;송순호;허광범
    • 에너지공학
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    • 제25권2호
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    • pp.29-36
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    • 2016
  • 도시지역에서는 발전용 디젤엔진의 운영비를 절약하기 위해 천연가스와 디젤을 섞어서 쓰려는 노력을 하고 있다. 본 연구에서는 디젤 연료의 일부를 천연가스로 대체 하였을 때 엔진특성과 천연가스로 대체되는 양에 따라 최적의 밸브 타이밍을 찾아보았다. 1-D 엔진 해석프로그램을 사용하여 19.7리터 발전용 디젤 엔진을 대상으로 모델링하여 연구를 진행하였다. 연구 결과 엔진연료에서 천연가스 비율이 증가할수록 연료소비율(Brake Specific Fuel Consumption, BSFC)는 증가하였고 질소산화물(Brake Specific NOx)는 감소하였다. 추가적으로 흡기밸브 타이밍을 조절할 경우 BSFC가 최대 1%감소하였고 BSNOx의 경우 최대 36%감소하는 효과가 있었다.

NATM 터널굴착시 응력-간극수압 연계 3차원 유한요소모델링을 통한 기존 지하철터널의 구조적 안정성 해석연구 (Structural Stability Analysis Study for Existing Subway Tunnels Using a 3D Stress-Pore Pressure Coupled Finite Element Modelling of NATM Tunneling)

  • 공병승
    • 한국구조물진단유지관리공학회 논문집
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    • 제13권6호통권58호
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    • pp.192-203
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    • 2009
  • 본 연구는 경부고속철도(대구~부산) 도심통과 노반신설 공사중 기존 부산지하철 1호선 및 부산지하철 2호선 구간에 대한 안정성에 관한 연구로서 현장조사를 실시하여 대상시설물의 외관상태, 품질상태 및 내구성능 등을 평가하고 MIDAS/GTS를 이용한 수치해석을 통해 대상시설물 및 본선터널의 안정성을 검토하는데 그 목적이 있다. 지하수위 하에서 터널이 시공되는 기본 메카니즘과 3차원 유한요소해석 응력-간극수압 연계해석을 수행한 후 라이닝 작용하중, 막장안정성, 지표침하 등 지하수와 터널굴착의 상호관계를 고찰하였다. 수치해석의 결과 1, 2호선의 최대침하, 부등침하, 라이닝응력 등은 허용치 이내이며 손상 정도는 무시할 수 있는 정도의 경미한 것으로 나타나고 있다. 그러나 실제 터널 시공시 막장거동을 최소화하기 위하여 필요시 Pre-Grouting을 시행하여 터널 굴착시 터널내 유출수를 최소화하는 것이 필요할 것으로 판단된다.

폐 CT 영상에서의 노이즈 감소를 위한 U-net 딥러닝 모델의 다양한 학습 파라미터 적용에 따른 성능 평가 (Performance Evaluation of U-net Deep Learning Model for Noise Reduction according to Various Hyper Parameters in Lung CT Images)

  • 이민관;박찬록
    • 한국방사선학회논문지
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    • 제17권5호
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    • pp.709-715
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    • 2023
  • 본 연구의 목적은, U-net 딥러닝 모델을 이용하여 CT 영상에서의 노이즈 감소 효과를 다양한 하이퍼 파라미터를 적용하여 평가하였다. 노이즈가 포함된 입력 영상 생성을 위하여 Gaussian 노이즈를 적용하였고, 총 1300장의 CT 영상에서 train, validation, test 셋의 비율을 8:1:1로 유지하여 U-net 모델을 적용하여 학습하였다. 연구에서 적용된 하이퍼파라미터는 최적화 함수 Adagrad, Adam, AdamW와 학습횟수 10회, 50회, 100회와 학습률 0.01, 0.001, 0.0001을 적용하였으며, 최대 신호 대 잡음비와 영상의 변동계수 값을 계산하여 정량적으로 분석하였다. 결과적으로 U-net 딥러닝 모델을 적용한 노이즈 감소는 영상의 질을 향상시킬 수 있으며 노이즈 감소 측면에서 유용성을 입증하였다.

한국인 베체트 환자의 분자유전학적 연구 (Molecular Genetic Analysis of Behcet's Disease in Korean)

  • 박상범;남윤형;박수민;이상현;안영창;조민호;김종규;최재구;김성규;장원철
    • 대한화학회지
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    • 제51권6호
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    • pp.536-542
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    • 2007
  • 베체트 병은 여러 장기에서 발생하는 만성 염증성 질환이다. 베체트병에서 염증은 T-helper type 1 (Th1) 림프구에서 분비된 싸이토카인에 의해 유도된다. 베체트병의 발병원인이나 기전에 대해 확실히 밝 혀지지는 않았으나 유전적인 소인이 있는 사람에서 감염 등 환경적인 요인이 면역 반응에 이상을 일으켜 질병의 여러 증상이 발현된다. 주조직복합체(major histocompatibility complex, MHC)와 non-MHC gene 등 다양한 유전자들이 베체트병의 병인으로 관여한다. 이 연구에서는 HLA-B51, IL-18, SLC11A1, TNF-α의 유 전적 다형성이 한국인 베체트병의 감수성에 관여하는지를 확인하였다. 실험 결과, HLA-B51이 베체트병과 가장 연관성이 큰 유전인자로 나타났지만, HLA 분자가 베체트병의 직접접인 병인인지는 확실하지 않다. IL- 18은 베체트병 환자와 대조군 간에 연관성은 없었으나 안구병변을 가지고 있는 환자에서 -137 G/G 유전자 형이 높게 나타났다. SLC11A1 유전자에서 (GT)n의 다형성의 allele 3과 genotype allele 3/ allele 3이 한국 인 베체트병의 방어 효과를 갖는 것으로 추정된다. TNF-α gene의 유전자 다형성은 베체트병 감수성에 있 어서의 연관성을 찾지 못하였다.

Expression of Human Liver 3,4-Catechol estrogens UDP-Glucuronosyltransferase cDNA in COS 1 Cells

  • Ahn, Mee-Ryung;Owens, Ida-S.;Sheen, Yhun-Yhong
    • Archives of Pharmacal Research
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    • 제20권5호
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    • pp.465-470
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    • 1997
  • The human cDNA clone UDPGTh2, encoding a liver UDP-glucuronosyltransferase (UDPGT), was isolated from a .gamma.gt 11 cDNA library by hybridization to mouse transferase cDNA clone, UDPGTm1. The two clones had 74% nlicleotide sequence identities in the coding region. UDPGTh2 encoded a 529 amino acid protein with an amino terminus membrane-insertion signal peptide and a carboxyl terminus membrane-spanning region. In order to establish substrate specificity, the clone was inserted into the pSVL vector (pUDPGTh2) and expressed in COS 1 cells. Sixty potential substrates were tested using cells transfected with pUDPGTh2. The order of relative substrate activity was as follows: 4-hydroxyestrone > estriol >2-hydroxyestriol > 4-hydroxyestradiol > $6{\alpha}$-hydroxyestradiol >$5{\alpha}$-androstane-$3{\alpha}$, $11{\beta}$, $17{\beta}$-triol=5${\beta}$-androstane-$3{\alpha}$ ${\beta}$, $17{\beta}$-triol. There were only trace amounts of gulcuronidation of 2-hydroxyestradiol and 2-hydroxyestrone, and in contrast to other cloned transferase, no gulcuronidation of either the primary estrogens and androgens (estrone, $17{\beta}$estradiol/testosterone, androsterone) or any of the exogenous substrates tested was detected. A lineweaver-Burk plot of the effect of 4-hydroxystrone concentration on the velocity of glucuronidation showed an apparent Km of $13{\mu}M$. The unique specificity of this transferase might play an important role in regulating the level and activity of these potent and active estrogen metabolites.

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Acacia ferruginea Inhibits Tumor Progression by Regulating Inflammatory Mediators-(TNF-α, iNOS, COX-2, IL-1β, IL-6, IFN-γ, IL-2, GM-CSF) and Pro-Angiogenic Growth Factor-VEGF

  • Sakthivel, Kunnathur Murugesan;Guruvayoorappan, Chandrasekaran
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제14권6호
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    • pp.3909-3919
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    • 2013
  • The aim of the present investigation was to evaluate the effect of A ferruginea extract on Dalton's lymphoma ascites (DLA) induced tumours in BALB/c mice. Experimental animals received A ferruginea extract (10 mg/kg.b.wt) intraperitoneally for 14 consecutive days after DLA tumor challenge. Treatment with extract significantly increased the life span, total white blood cell (WBC) count and haemoglobin (Hb) content and decreased the level of serum aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), gamma glutamyl transferase (${\gamma}$-GT) and nitric oxide (NO) in DLA bearing ascites tumor models. In addition, administration of extract significantly decreased the tumour volume and body weight in a DLA bearing solid tumor model. The levels of pro-inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor-alpha (TNF-${\alpha}$), interleukin-1 beta (IL-$1{\beta}$), interleukin-6 (IL-6) and granulocyte monocyte-colony stimulating factor (GM-CSF), as well as pro-angiogenic growth factors such as vascular endothelial growth factor (VEGF) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) were elevated in solid tumour controls, but significantly reduced by A ferruginea administration. On the other hand, the extract stimulated the production of interleukin-2 (IL-2) and interferon-gamma (IFN-${\gamma}$) in animals with DLA induced solid tumours. Increase in $CD4^+$ T-cell population suggested strong immunostimulant activity for this extract. GC/MS and LC/MS analysis showed quinone, quinoline, imidazolidine, pyrrolidine, cyclopentenone, thiazole, pyrazole, catechin and coumarin derivatives as major compounds present in the A ferruginea methanolic extract. Thus, the outcome of the present study suggests that A ferruginea extract has immunomodulatory and tumor inhibitory activities and has the potential to be developed as a natural anticancer agent.

Association of RAD 51 135 G/C, 172 G/T and XRCC3 Thr241Met Gene Polymorphisms with Increased Risk of Head and Neck Cancer

  • Kayani, Mahmood Akhtar;Khan, Sumeera;Baig, Ruqia Mehmood;Mahjabeen, Ishrat
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제15권23호
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    • pp.10457-10462
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    • 2015
  • Homologous recombination repair (HRR) plays an important role in protection against carcinogenic factors. Genes regulating the HRR mechanisms may impair their functions and consequently result in increased cancer susceptibility. RAD 51 and XRCC3 are key regulators of the HRR pathway and genetic variability in these may contribute to the appearance and progression of various cancers including head and neck cancer (HNC). The aim of the present study was to compare the distribution of genotypes of RAD51 (135G/C, 172 G/T) and XRCC3 (Thr241Met) polymorphisms between HNC patients and controls. Each polymorphism was genotyped using the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymerase (PCR-RFLP) technique in 200 pathologically confirmed HNC patients along with 150 blood samples from normal, disease free healthy individuals. We observed that homozygous variant CC genotype of RAD51 135G/C was associated with a 2.5 fold increased HNC risk (OR=2.5; 95%CI=0.69-9.53; p<0.02), while second polymorphism of RAD 51 172 G/T, heterozygous variant GT genotype was associated with a 1.68 fold (OR=1.68; 95%CI=1.08-2.61; p<0.02) elevation when compared with controls. In the case of the Thr241Met polymorphism of XRCC3, we observed a 16 fold (OR=16; 95% CI=3.78-69.67; p<0.0002) increased HNC risk in patients compared to controls. These results further suggested that RAD51 (135G/C, 172 G/T) and XRCC3 (Thr241Met) polymorphisms may be effective biomarkers for genetic susceptibility to HNC. Larger studies are needed to confirm our findings and identify the underlying mechanisms.

북태평양(北太平洋) 중층(中層)트롤그물의 발달(發達) (The Development of Midwater Trawl Net in North Pacific Ocean)

  • 권병국;장호영
    • 수산해양교육연구
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    • 제6권1호
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    • pp.11-19
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    • 1994
  • The North Pacific midwater trawling which is one of the important fishing methods for Korean fishing industry is working in the Bering Sea and the sea near Kamchaka Peninsula. The catch by Korean midwater trawlers had been recorded about 300 thousands $^{M/_T}$ a year. Six types of midwater trawl net-ordinary midwater trawl net, super-V trawl net, super mesh trawl net, rope trawl net, super plus trawl net and kite trawl net-have been widely used by large trawlers above 1,500gt in size since 1982. Regarding the fishing efficiency, the super plus trawl net and kite trawl net were acknowledged as higher than other nets. Maximum mesh size of super-plus trawl net and kite trawl net ranges about 20m, whereas the length of net about 150m, and high-tech polyethylene is used as the material of rope part. The problems involved in the North Pacific midwater trawl net may be summarized as follows ; (1) The dimension of fishing gear is too big compared with the towing power of trawler. (2) The mesh size of the rope part is too big compared with that of the common netting part. (3) The net is often torn out in the connecting position of the rope part and the netting part. (4) The net is not matched with the trawler and the otter board in many trawlers, so the shape of the trawl gear in the water is instable. (5) The fish school located near head rope, ground rope and side rope in the net recorder is not caught in practice because of the net instability.

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