한국산 칡 (Pueraria thunbergiana)의 에스트로겐성을 평가하기 위하여 9종의 물질의 함량을 HPLC로 측정하였고, 그들의 에스트로겐성을 in vitro screening test인 estrogen receptor dependent transcriptional expression assay를 이용하여 평가하였다. Phytochemical 함량을 분석한 결과 칡의 대표적 에스트로겐성 물질인 daidzein의 경우, 뿌리>줄기>잎>꽃>종자의 순서로 나타났고, 칡에서 가장 함량이 많은 puerarin의 경우도 뿌리>줄기>일>꽃>종자 순서로 함유되어 있었다. Phytochemical들의 에스트로겐 활성도 측정 결과 효능(potency)은 daidzein>genistein>biochanin A>formononetin>puerarin>genistin >> glycitein = daidzin = glycitin 순이었다. 17$\beta$-estradiol에 대한 1 $\mu$M에서의 상대효율 (relative efficiency)은 genistein>biochanin A>daidzein>genistin>formononetin>puerarin>>glycitein = daidzin = glycitin순이었다. 또한 칡의 부위별, 지역에 따른 칡의 에스트로겐성을 조사하였다. 칡의 부위별 에스트희겐성은 뿌리>줄기>잎>꽃>종자 순으로 나타났다. 또한 지역별로도 칡의 에스트로겐성에서 차이를 보였다: Mokpo>Ulsan> Je-cheon>Pochon>Taebaek>Punggi. 이상의 결과 칡에는 다양한 에스트로겐성 물질이 다량 함유되어 있으며, 뿌리에 가장 많고, 줄기 등 다른 부위에도 함유되어 있음을 알 수 있었다.
1997년 7월부터 1999년 6월까지 2년간 제주도 남부해역인 중문 하예동 연안에서 매월 채집한 말쥐치, Thamnaconus modestus의 생식주기를 조직학적인 방법으로 연구하였다. 암 수컷의 GSI 변화에 있어서 암컷은 5월, 수컷은 6월에 년 중 최고값을 보였다. 생식주기는 암컷인 경우 성장기 3~4월, 성숙기 4~5월, 산란기 5~6월, 퇴화 및 휴지기 7~2월로 구분되었고, 수컷인 경우 성장기 1~3월, 성숙기 4~5월, 방정기 5~6월, 퇴화 벚 휴지기 7~12월로 구분할 수 있었다. 산란기간 동안 말쥐치 암컷을 대상으로 이들의 산란주기 및 산란횟수를 알아보기 위해 생식소 발달상을 조직학적인 방법으로 관찰하고 성 steroid 호르몬인 estradiol-$17{\beta}$ ($E_2$)와 testosterone (T)의 혈중 농도를 RIA 검사를 통하여 조사한 결과 말쥐치는 비동시발달형에 속하는 어종으로 산란기간내 적어도 2 회 이상 산란을 하는 다회산란종으로 추정되며, $E_2$와 T의 혈중 농도 변화는 난모세포의 성숙과 GSI 변동에 거의 상동적으로 변화하고 있었다.
Objective: Although chronic non-bacterial prostatitis is a common disease, it is very difficult to treat effectively. Lygodium japonicum has traditionally been used in treatment of urinary tract inflammation and voiding disturbance. In this study, we investigated the therapeutic effects and action mechanism of Lygodium japonicum in the rat model of non-bacterial prostatitis induced by castration and testosterone treatment. Methods: Five-month-old rats were treated with $17\beta-estradiol$ after castration for induction of experimental non-bacterial prostatitis, which is similar to human chronic prostatitis in histopathological profiles. Lygodium japonicum and testosterone were administered as an experimental specimen and a positive control, respectively. The prostates were evaluated by histopathological parameters including the epithelial score and epithelio-stromal ratio for glandular damage, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) labeling index for cyto-proliferation and a TUNEL (deoxyuridine triphosphate biotin nick end-labeling) assay for cell apoptosis. Results: While prostates of control rats revealed severe acinar gland atrophy and stromal proliferation, the rats treated with Lygodium japonicum showed a lesser range of tissue damage. Epithelial score was improved in Lygodium japonicum than that of the control (P<0.05). The epithelio-stromal ratio was lower in Lygodium japonicum when compared to that of the control (P<0.05). Although there was no difference in PCNA and TUNEL positive cells of the glandular epithelia, we found an decreased number of PCNA positive cell and concurrent increase of TUNEL positive cells in the stroma of Lygodium japonicum treated rats (P<0.01). Conclusions: These findings suggest that Lygodium japonicum may protect the glandular epithelial cells and also inhibit stromal proliferation in association with suppression of cyto-proliferation and stimulation of apoptosis. We concluded that Lygodium japonicum may be a useful remedy agent for treating the chronic non-bacterial prostatitis.
The developmental toxicity of water extract of licorice (Glycyrrhiza glabra) was evaluated in rats. Licorice extract (500, 1,000 or 2,000 mg/kg) was dissolved in drinking water and orally administered to male rats from 9 weeks before mating to the day of copulation, and to females from 2 weeks before mating to gestational day 19. On gestational day 20, the animals were sacrificed for Cesarian section, and maternal and fetal abnormalities were examined. Licorice extract neither induce clinical signs, nor affect the body weight gain, feed and water intake, estrous cycle, copulation and fertility rates, blood $17\beta-estradiol$ level and organ weights of dams. Also, the implantation and development including body weights, absorption and death of embryos and fetuses were not influenced by in utero exposure to licorice. In addition, there were no increases in external, visceral and skeletal abnormalities of fetuses. Taken together, it is suggested that no observed adverse effect level of licorice extract is higher than 2,000 mg/kg, and that long-term in utero exposure to licorice might not cause developmental toxicities of embryos and fetuses.
The aims of this study were, firstly, to analyze the biochemical compositions of serum and follicular fluid (FF) from prepubertal gilts after PMSG (1,000 IU) treatment. The concentrations of total proteins, lipids, cholesterol, glucose and sex hormones (progesterone, $P_4$; estradiol-$17{\beta}$, $E_2$; testosterone, T) were measured. Secondary, the effects of porcine FF (pFF) addition (40% and 100%) in IVM media and different culture conditions [Exp. 1: mBMOC-2+20% porcine serum (PS), fresh IVM medium, filtered IVMconditioned medium, or rabbit oviducts; Exp. 2: mBMOC-2+20%PS or stepwise medium replacement procedures (SMRP) cocultured with or without cumulus cells] on the in vitro development (IVD) of porcine oocytes were also examined. Results showed that no significant differences were found in total protein levels between serum and pFF from different sizes (large, >7 mm; medium, ~5-7 mm; small, <3-5 mm) of follicles (75-85 and 49-90 mg/dl; p>0.05). Total lipid concentrations remained constant in serum (395-472 mg/dl), and reduced significantly in the pFF from large follicles (287 mg/dl) at 132 h after PMSG treatment when compared to those at other time points (441-480 mg/dl). Basal cholesterol levels in serum and pFF at 12 h were similar (153-161 mg/dl), but increased at 36 h (186-197 mg/dl). Basal P4 and E2 levels in serum (0.1 ng/ml and 5.5 pg/ml) were low, but increased from 0.34 ng/ml and 12.13 pg/ml at 24 h to 0.81 ng/ml and 61.70 pg/ml at 98 h, respectively, after PMSG treatment (p<0.05). P4 levels increased linearly in pFF from large follicles during 12 through 132 h (138-1,288 ng/ml). A similar increase was also observed in $E_2$ levels (22-730 pg/ml) before 60 h post PMSG treatment, and then dropped afterwards (730-121 pg/ml). The development of the oocytes fertilized in 40% pFF-medium was greater than that in 100% pFF-medium group without gonaodtropin addition (31% vs 10%, p<0.05). However, both were lower than those in mBMOC-2+20%PS and in rabbit oviducts (p<0.05). When cocultured with cumulus cell monolayers, a greater cleavage rate was observed in the group cultured in filtered IVM-conditioned medium than the SMRP group (36% vs 18%, p<0.05). A similar phenomenon was also observed in the culture without cumulus cell monolayers (33% vs 19%, p<0.05). It is concluded that neither the fresh IVM nor filtered IVM-conditioned medium has positive effect on the IVD of oocytes. Coculture with cumulus cell monolayers and the SMRP were not beneficial to the development of IVF pig oocytes.
꺽지, Coreoperca herzi의 생식 년주기를 규명하기 위하여 1994년 7월부터 1996년 4월까지 경남 산청군 경호강에서 실험어를 채집하여 수온, 일장, GSI, HSI, 생식소의 조직학적 조사 및 혈중 스테로이드 호르몬의 농도변화를 조사하였다. GSI는 2월부터 급격히 상승하여 4월에 최대치를 나타내고 5월까지 높은 값을 유지하다가 하강하기 시작하여 8월에 최저값을 나타내었다. 혈중 E2, testosterone의 혈중 스테로이드 호르몬 농도는 GSI의 변화와 유사한 양상을 나타냈다. 방란, 방정 후 난소 소낭 내에서는 짧은 퇴화기가 관찰되며, 어린 난모세포가 계속 성장하여 난황합성 전기의 상태에서 저수온기에 휴지기 상태로 월동하여 이듬해 수온 상승기에 일제히 성장한다. 정소 역시 짧은 퇴화기(7월)와 오랜 휴지기(10~2월)를 가진다. 본 종의 생식 년주기는 성장 및 성숙기(2월~4월 초순), 완숙 및 산란기(4월 하순~6월 초순), 퇴화 및 정체기(7~8월), 회복기 (9월~11월 초순), 휴지기 (12월~1월)로 나누어지며 주 산란기는 5월이었다.
2년령의 암컷 비글개에서 교배 후 7일째에 혈액장액성 질 분비물과 외음부 종창의 주증을 보여 이를 진단하기 위해서 질 도말 검사, 초음파 검사를 실시하였다. 초음파 검사 소견상 양측 난소에 10mm 이상의 낭종성 구조물이 다수 관찰되어 양측성 다포성 난소낭종으로 진단하였다. 또한 질 도말 검사에서는 각화 상피세포가 90% 이상이었으며, 수컷의 허용 반응을 확인한 결과 수컷의 허용은 물론 정상적인 교배가 이루어졌다. 이상의 소견을 종합해 본 결과 본 증례는 양측성 다포성 난포낭종으로 진단하였으며 GnRH $50{\mu}g$으로 치료를 실시하였다. 치료후 2주째에 낭종의 크기는 현저하게 감소되었으며, 난포낭종으로 진단되기 전 최후 교배일로부터 68일째에 1두의 거대 태아를 분만하였다. 한편, 난포낭종 발생 시기와 임신이 이루어진 시기가 어느 시기인지를 판정하기 위하여 혈장 progesterone 농도 및 estrogen 농도를 측정한 결과, 난포낭종의 진단시 혈장 estrogen 농도는 78.0 pg/ml 이었고 난포낭종의 진단 전 최후 교배시 progesterone 농도는 6.87ng/ml, 난포낭종의 진단 시 progesterone 농도는 66.93ng/ml이었다. 이상의 결과를 미루어 볼 때 본 증례의 비글견에서 난포낭종이 발생한 시기는 발정 휴지기였으며, 난포낭종의 진단 전 최후 교배 시 임신이 이루어졌던 것으로 확인되었다.
This study investigated the effects of recombinant eel gonadotropin hormone (rJeGTH) produced in silkworms, with and without a carboxyl-terminal peptide from equine chorionic gonadotropin (eCG), on the induction of sexual maturation in female eels Anguilla japonica. Experiments were conducted both in vivo and in vitro. In in vitro trials, germinal vesicle breakdown (GVBD) induction did not significantly differ between rJeFSH and $rJeFSH{\cdot}eCG$ treatments and the control group. However, previous studies did find that rJeLH and $rJeLH{\cdot}eCG$ treatments induced GVBD in female eels. Our in vitro exploration of $estradiol-17{\beta}$ ($E_2$) levels in immature ovarian tissues revealed significantly higher $E_2$ levels in the group treated with $rJeFSH{\cdot}eCG$$1{\mu}g/mL$ than in the control group. In contrast, the in vivo experiments showed no effect of recombinant hormones on the sexual maturation of feminized eels. Previous studies and our own in vitro results have clearly shown that rJeGTH and $rJeGTH{\cdot}eCG$ have a positive effect on the sexual maturation of feminized eels. To develop the activity of rJeGTH in vivo, further studies should confirm circulation time and activity of these hormones in eels' bloodstream, modify the structure of the recombinant gene, and implement additional glycosylation.
Gonadotropin-releasing hormone receptor (GnRHR) gene is expressed at the anterior pituitary gland and plays a key role in gonad development. This study aimed to investigate molecular genetic characteristics of the GnRHR gene and elucidate the effects of single nucleotide polymorphisms (SNPs) of GnRHR gene on sex steroid level in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus). We used polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and sequencing of the GnRHR gene in 75 individuals. We identified three SNPs in the GnRHR gene: P1 locus (C759A and C830T) in the coding region of exon2 which were both linked together and P2 locus (G984T) in the coding region of exon3, which added a new transcript factor (ADR1) and a new methylation site (CG). Only C830T of P1 leads to amino acid changes Thr266Ile. Statistical analysis showed that P1 was significantly associated with $17{\beta}$-estradiol ($E_2$) level (p<0.01) and gonadosomatic index (GSI) (p<0.05). Individuals with genotype BB of P1 had significantly higher serum $E_2$ levels (p<0.01) and GSI (p<0.05) than those of genotype AA or AB. Another SNP, P2, synonymous mutation, was significantly associated with GSI (p<0.05). Individuals with genotype AB of P2 had significantly higher GSI (p<0.05) than that of genotype AA. In addition, there was a significant association between one diplotype based on three SNPs and reproductive traits. The genetic effects for both serum $E_2$ level and GSI of diplotype D4 were super diplotypes (p<0.05). These results suggest that the SNPs in Japanese Flounder GnRHR are associated with $E_2$ level and GSI.
Kim, Soon-Sun;Rhee, Gyu-Seek;Lee, Rhee-Da;Kwack, Seung-Jun;Lim, Kwon-Jo;Yhun, Hyo-Jung;Park, Kui-Lea
한국환경독성학회:학술대회논문집
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한국환경독성학회 2003년도 추계국제학술대회
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pp.57-69
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2003
It is well known that many pesticides possess hormonal activity, and affect the developments of wildlife and mammals including human. Currently, pyrethroid insecticides are in worldwide use to control in and outdoor pests, providing potential far environmental exposure. Hormonal activities of these pyrethroid insecticides, however, have been little studied, and the developmental effects of them were no reported. Therefore, we firstly examined the potential estrogenic activities of some pyrethroid insecticides (permethrin, cypermethrin, tetramethrin, deltamethrin, sumithrin, fenvalerate and bioallethrin) by immature rat uterotrophic assay, luciferase reporter gene assay and Calbindin-D$\sub$9k/ (CaBP-9k) gene expression assay. Uterine wet weights were increased by permethrin and the permethrin-induced weights were inhibited by ICI 182780 in the uterolrophic assay. On the other hand tetramethrin significantly reduced uterine and vaginal wet weights, and also inhibited the E2-induced weight increases at all doses tested. Cypermethrin and sumithrin had a tendency to increase uterine weights, although not statistically significant. Permethrin and cypermethrin dose-dependently increased the luciferase activity in reporter gene assay. Northern blot analysis showed that permethrin induced CaBP-9k mRNA expression whereas tetramethrin inhibted. Subsequent studies were conducted to investigate the possible developmental effects of four pyrethroid insecricides (permethrin, cypermethrin, sumithrin and teramethrin). Either diethlbestrol (DES) or 17${\beta}$ -estradiol (E2) was used as a reference control in this study. Pyrethroid insecticides were administered to Sprague Dawley rats via subcutaneous injection at 6 to 18 days of gestation or 1 to 5 days after birth. In utero treatment of permethrin (10mg/kg/day) in female rat resulted in significant increases in uterine and ovarian weights while significant decreases in serum E2 concentration, uterine and ovarian ER${\alpha}$ mRNA levels. Sumithrin and permethrin led to acceleration in vaginal opening of female rat, while delay in preputial separation of male after neonatal treatment. Anogenital distances of PND 18 were significantly reduced in sumthrin-treated, and permerhrin-treated male rats after neonatal treatment. All the pyrethroid insecticides tested caused significant increases in uterine weights on PND 18, while significant reductions in the first diestrus phase when neonataly treated. In addition, exposure to pyrethroids in neonatal period led to significant reduction in relative brain weight in female rat on PND 18, but its weight was recovered in diestrus phase. In summary, Our experimental data demonstrate the possibilities of developmental effects of pyrethroid insecticides via estrogenic or antiestrogenic activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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