Kim, Kyoung-Sun;Kim, Hyun-Woo;Chen, Thomas T.;Kim, Young-Tae
BMB Reports
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제42권4호
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pp.206-211
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2009
Proopiomelanocortin (POMC) plays an essential role in the stress response of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis, and is the precursor of biologically active peptides such as adrenocorticotropin (ACTH), $\alpha$-melanocyte-stimulating hormone ($\alpha$-MSH), $\beta$-melanocyte-stimulation hormone ($\beta$-MSH) and $\beta$-endorphin. We have synthesized two different forms of POMC cDNA clones, POMC-I and POMC-II, from a pituitary cDNA library for Paralichthys olivaceus, or Japanese flounder. jfPOMC-I cDNA consists of 954bp and encodes a polypeptide of 216 amino acid residues, whereas jfPOMC-II consists of 971bp which encode a polypeptide of 194 amino acid residues. The high levels of jfPOMC-I and -II mRNAs detected in the pituitary tissue and moderate levels detected in the brain tissue plus our quantitative RT-PCR analysis, which showed there to be no significant difference between the levels of jfPOMC-I and -II mRNAs, indicate that there may be no functional separation between these two mRNAs in the flounder.
A ${\beta}$-galactosidase with high transgalactosylic activity was purified from a Bacillus species, registered as KFCC10855. The enzyme preparation showed a single protein band corresponding to a molecular mass of 150 kDa on SDS-PAGE and gave a single peak with the estimated molecular mass of 250 kDa on Sephacryl S-300 gel filtration, suggesting that the enzyme is a homodimeric protein. The amino acid and sugar analyses revealed that the enzyme is a glycoprotein, containing 19.2 weight percent of sugar moieties, and is much more abundant in hydrophilic amino acid residues than in hydrophobic residues, the mole ratio being about 2:1. The pI and optimum pH were determined to be 5.0 and 6.0, respectively. Having a temperature optimum at $70^{\circ}C$ for the hydrolysis of lactose, the enzyme showed good thermal stability. The activity of the enzyme preparation was markedly increased by the presence of exogenous Mg (II) and was decreased by the addition of EDTA. Among the metal ions examined, the most severely inhibitory effect was seen with Ag (I) and Hg (II). Further, results of protein modification by various chemical reagents implied that 1 cysteine, 1 histidine, and 2 methionine residues occur in certain critical sites of the enzyme, most likely including the active site. Enzyme kinetic parameters, measured for both hydrolysis and transgalactosylation of lactose, indicated that the enzyme has an excellent catalytic efficiency for formation of the transgalactosylic products in reaction mixtures containing high concentrations of the substrate.
The Oomycete Saprolegnia ferax produces an extracellular $\beta$-amylase, Maximum enzyme yield was attained after 7 days of growth in YNB starch medium (pH 6.5) at 25$\circ$C. The amylase was pu- rified 24-fold by ultrafitration, HPLC DEAE column and HPLC gel filtration. The purfied enzyme was a monomeric glycoprotein with a molecular weight of about 44,000 dalton. The pH and temperature optima were 6.5 and 50$\circ$C, respectively. The enzyme was fairly stable up to 50$\circ$C and at acidic pH region (pH 4.0-7.0). The apparent Km and Vmax values of the enzyme against soluble starch were 0.77 mg/ml and 2,174 $\mu$moles/mg protein, respectively. Amino acid analysis indicated that the enzyme was enriched in alanine, glycine, leucine and acidic amino acid. Starch hydrolysis with the enzyme released maltose but not glucose, whereas maltotriose, Schardinger dextrin ($\alpha$-cyclodextrin) and pullulan were not hydrolysed by the enzyme. The enzyme was inhibited by Schardinger dextrin, p-chloromercuribenzoate(PCMB), CU$^{2+}$' and Hg$^{2+}$. Inhibition of the enzyme by PCMB could be reversed by the addition of cysteine and mercaptoethanol.
효모 Kluyveromyces fragilis SKD-7001로부터 정제한 ${\beta}-galactosidase$를 이용하여 시유의 유당을 가수분해 시키고, 이 효소의 처리유로 요구르트를 제조하여 이들의 이화학적 성분의 변화를 검토하였다. 효소의 농도를 3.0units/ml 처리시 120분간 $40^{\circ}C$에서 반응시켰을 때 유당의 가수분해율이 75.0%를 나타내었고, 6.0units/ml 처리시 120분간 반응시켰을 때에는 94.6%이었다. ${\beta}-galactosidase$의 처리유로 요구르트를 제조하여 pH, 산도, 유산균의 생균수를 정토해 본 결과, $40^{\circ}C$에서 8시간 매양하였을 때 pH4.1, 산도 1.04% 그리고 유산균의 생균수는 각각 Str. thermophilus가 $6.5{\times}10^8/ml$, L. bulgaricus가 $8.9{\times}10^8/ml$를 나타내었다. 총 아미노산을 분석해 본 결과 총 함량은 대조 요구르트가 2.63%, LH 요구르트가 2.19%로써, LH 요구르트보다 대조 요구르트 함량이 더 높은 것으로 나타났다. 유리 아미노산을 분석해 본 결과 총 함량은 시유의 경우 대조 요구르트가 26.95mg%, LH 요구르트가 17.55mg%로써, LH 요구르트보다 대조 요구르트의 함량이 더 높은 것으로 나타났다. 지방산에 있어서는 LH 요구르트가 대조 요구르트보다 caprylic, capric, lauric acid 등의 저급 지방산 함량이 약간 높은 경향을 보였고, 고급 지방산 중에서는 palmitic acid의 함량이 가장 많은 것으로 나타났다.
한국 근해에서 양식되고 있는 김류의 함질소엑스성분조성 및 월별변동현상을 구명하기 위하여 1998년 1월부터 4월까지 전남 장흥군에서 양식된 방사무늬김 Porphyra yezoensis을 매월 1회씩 채취하여 건제품으로 가공한 다음 맛과 밀접한 관계가 있는 함질 소엑스성분 즉, 엑스분질소, 유리아미노산, 결합아미노산, ATP관련화합물, 4급암모늄염기 등을 분석하였다. 엑스분질소함량은 $976\~1,196\;mg/100\;g$ (건물)이었다. 유리 아미노산은 $28\~31$종이 검출되었으며, 그 총량은 $5,648\~6,845mg/100g$ (건물)이었다. 함량이 많은 유리아미노산으로서는 alanine, glutamic acid, taurine, phosphoserine. aspartic acid 등이었다. 결합아미노산은 가수분해후 $18\~22$종에서 증가되었으며, 그 총량은 $1,194\~1,406mg/100g$ (건물)이었으며, 유리아미노산총량의 $19.6\sim22.9\%$ 수준으로서 중요한 함질소 엑스성분이었다 ATP관련화합물총량은 $111.6\~195.5mg/100g\;(3.30\~6.00{\mu}mol/g$, 건물)수준이었다. Betaine류는 마른 김에서 homarine이 모든 시료에서 검출되었고, trigonelline은 1월 시료에서만 확인되었다. Glycinebetaine, $\beta$-alaninebetaine 및 $\gamma$-butyrobetaine은 가공과정 중 소실되었다. TMA는 모든 시료에서 검출되었고, TMA는 일부시료에서만 확인되었다. 방사무늬김은 생야을 건제품으로 가공함으로서 유리아미노산은 증가하고 결합 아미노산 함량은 감소되었다. 또한 ATP관련화합물은 증가한 반면 TMAO와 TMA, betaine류는 전반적으로 감소되었다.
Tyrosinase was purified from Solanum melongena by ammonium sulfate precipitation, Sephadex G-150 and DEAE-Sephacel column chromatography. The molecular weight of the purified tyrosinase was approximately 88,600 daltons with 805 amino acid residues. The amino acid composition showed the characteristic high contents of glycine, glutamic acid and serine residues. The enzyme had high substrate specificity towards (+)-catechin. The $K_m$, value for L-DOPA was 20.8 mM. L-ascorbic acid, ${\beta}-mercapto-ethanol$, sodium diethyldithiocabamate, KCN and $NaN_3$ had strong inhibitory effects on enzyme activity. Sodium diethyldithiocabamate was a competitive inhibitor of the enzyme with a $K_i$ value of $5.2{\times}10^{-2}\;mM$. The optimum pH of the enzyme was 9.0 and the optimum temperature was $65^{\circ}C$ with L-DOPA as a substrate. In addition, the activity was enhanced by addition of $Ca^{+2}$ or $Cu^{+2}$, but decreased in the presence of $Fe^{2+},Fe^{3+}$ and $Zn^{2+}$ ions.
본 연구는 우리나라에 자생하는 전조의 근에 대한 조성분, 유리 아미노산, 향기성분 등의 분석을 통하여 향료작물로서의 가능성을 검토하고자 수행하였는 바 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다 1. 전조 뿌리의 조성분가운데 조단백질은 7.69%, 조지방 1.74%, 조섬유 2.44%, 그리고 조회분은 3.76% 였으며 엑스 함량은 27.68%로 나타났다. 2. 유리 아미노산 조성 및 함량에서 종류는 총 16종이었으며 아미노산의 함량에 따른 순위는 phenylalanine>tyrosine>arginine>alanine>glutamic acid>aspartic acid>lysine>isoleucine>proline>glycine>histidine>thereonine>leucine>methionine>valine, serine이었고 유리 아미노산 함량 중 가장 높은 아미노산은 phenylalanlne으로 6.38 mg이었다. 3. 전조의 뿌리에 대한 향기성분은 $\alpha$-pinene, d-1imonene 등의 mono terpene류가 11종이었고 methyl eugenol 등의 phenyl propanoid류가 3종, 기타 8종으로 구성되어 있었으며 식물정유의 수율은 0.58%였다. 4. 종합적으로 볼 때, 한국산 전조에 대한 향료작물로서의 가능성이 있을 것으로 판단되어 금후 향기성분의 수율을 높이기 위한 재배법 연구의 일환으로 차광, 재배거리, 시비량 등의 시험이 필요한 것으로 판단되었다.
각종 CD와 여러 종류의 화합물, pH indicator, biostain, 아미노산, 천연배당체, 그리고 fatty acid 간의 inclusion complex 형성능을 비교하였다. Fatty acid가 각종 CD에 대한 포접형성능과 선택성 이 높아 CD 분리용 ligand로 적합함을 알았다. Fatty acid의 포접능과 선택성은 탄소쇄의 길이와 밀접한 상관관계를 나타내어 capric acid는 ${\alpha}$- CD와 palmitic acid는 ${\beta}$-CD와 높은 선택성을 보였다. Complex형성에 미치는 반융조건인 흔합 농도비, pH, ionic strength, 그리고 온도의 영향을 검토하였다. 적정 혼합 농도비는 CD가 50mM 그리고 lig and 인 fatty acid가 50mM 일 때 였으며 , 온도가 중 요한 형성조건으로 작용하였다. 포접되지 않은 CD 와 fatty acid가 포접 된 CD의 분자구조를 X-ray diffraction과 IR spectrum을 사용하여 비교 검토하였으며, DSC로 inclusion complex 형성반응의 ent thalpy의 변화값(${\gamma}H$)을 측정하여 발열반응임을 확인하였다.
임상균주인 Enterobacter spp.가 생성하는 신규 chromosomal AmpC $\beta$-lactamases의 유전자형 및 진화적 측면을 고찰하기 위해서 항생제 감수성 시험, pI값 측정, DNA 염기서열 분석, 진화적 유연관계를 새로운 발현$.$분비 벡터를 이용하여 수행하였다. 6개 임상균주에서 cephamycins (cefoxitin and cefotetan), amoxicillin, cephalothin 및 amoxicillin-clavulanic acid에 내성 요인인 AmpC $\beta$-lactamase 유전자를 pMSG1219에 cloning하여 그 특성을 조사하였다. 381-amino-acid $\beta$-lactamase를 암호화 하는 4개의 ampC 유전자($bla_EcloK992004.1$, $bla_EcloK995120.1$, $bla_EcloK99230$ 및 $bla_EareK9911729$)는 E. cloacae MHN1의 chromosomal ampC 유전자($bla_EcloMHN1$)와 99.6% 이상의 상동성을 나타냈으며 두 ampC 유전자($bla_Eclok9973$ and $bla_EcloK9914325$)는 E. cloacae 908R의 chromosomal ampC 유전자($bla_EcloQ9908R$)와 99.7% 상동성을 나타냈다. 이런 결과는 6개 ampC 유전자가 $bla_EcloMHN1$ or $bla_EcloQ9908R$로부터 유래되었음을 시산한다. 발현ㆍ분비 벡터를 이용하여 제조한 6개 transformant의 MIC값 양상 및 정확한 pI값은 E. coli 균주에 외부 유전자의 특성을 고찰하는 목적에 개발된 발현$.$분비 백터(pMSG1219)가 유용함을 의미한다.
We recently used degenerate PCR and locus-specific PCR methods to identify the endogenous retroviruses (ERV) in the bovine genome. Using the ovine ERV classification system, the bovine ERVs (BERVs) could be classified into four families. Here, we searched the most recently released bovine genome database with the partial nucleotide sequence of the pro/pol region of the BERV ${\beta}3$ family. This allowed us to obtain and analyze the complete genome of BERV ${\beta}3$. The BERV ${\beta}3$ genome is 7666 nucleotides long and has the typical retroviral organization, namely, 5'-long terminal repeat (LTR)-gag-pro-pol-env-LTR-3'. The deduced open reading frames for gag, pro, pol and env of BERV ${\beta}3$ en- code 507, 271, 879 and 603 amino acids, respectively. BERV ${\beta}3$ showed little amino acid similarity to other betaretroviruses. Phylogenetic analysis showed that it clusters with HERV-K. This is the first report describing the genetic structure and sequence of an entire BERV.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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