A submerged cultivation of Ganoderma lucidum was carried out in an air-lift fermenter system, and the effects of different pH processes on extracellular branched ${\beta}$-1,3-glucan(EPS) production and mycelial growth(MDW) were investigated. The controlled pH process improved the production of branched ${\beta}$-1,3-glucan and biomass in comparison to the uncontrolled pH process. However, the maximum production of branched ${\beta}$-1,3-glucan were obtained by the bi-staged pH process. From these results, we confirmed that the bi-staged pH process was the most effective for improving the production of branched ${\beta}$-1,3-glucan from submerged culture of G. lucidum.
진균류 유래의 ${\beta}$-glucan은 pathogen-associated molecular patterns의 일종이기도 하며 면역촉진과 항암작용을 나타냄이 알려져 있지만 세포 내 신호전달에 관해서는 알려진 바가 많지 않다. 대식세포주인 RAW264.7 세포에 불로초에서 추출한 ${\beta}$-glucan을 처리하였을 때 세포막에서는 덱틴-1, toll-like receptor 2, 4, 6의 발현이 증가되었으며, 세포 내에서는 macrophage inflammatory protein (MIP)-1a, MIP-$1{\beta}$, MIP-$1{\gamma}$, IL-$1{\beta}$ 그리고 tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$의 발현이 증가되었다. 또한 대식세포주에 불로초의 ${\beta}$-glucan과 PI3K 또는 MEK1/MEK2 억제제를 각각 처리하였을 때에 세포 내의 MIP-1a, MIP-$1{\beta}$, MIP-$1{\gamma}$, interleukin-$1{\beta}$, TNF-${\alpha}$의 발현이 감소되었다. 따라서 불로초의 ${\beta}$-glucan은 대식세포에서 MyD88의 경로인 PI3K/Akt를 경유할 뿐만 아니라 MEK 경로를 활성화시킴으로써 다양한 면역조절작용이 가능한 것으로 여겨진다.
항암, 항콜레스테롤, 항산화 및 면역증가 효과와 피부재생 효과 등 여러 가지 생리활성이 밝혀지고 있는 ${\beta}-1,3/1,6-glucan$은 크게 식물성 유래, 효모 및 곰팡이, 버섯유래의 것으로 등으로 분류할 수 있다. 본 연구에서는 이처럼 다양한 효능을 나타내는 버섯균사체로부터 ${\beta}-glucan$를 다량함유하고 보다 쉽게, 대량으로 생산하기 위한 일환으로 연구를 하였다. 이때 고분자 중합체인 ${\beta}-glucan$을 분리하여 핵자기 공명분석기로 분석한 결과 ${\beta}-1,3-$ 및 ${\beta}-1,6-$결합이 혼재되어 있는 ${\beta}-1,3/{\beta}1,6-glucan$의 전형적인 구조임을 확인 할 수 있었다. 또한 ${\beta}-1,3/{\beta}1,6-glucan$의 함량을 gel permeation chromatography으로 분석한 결과 $766{\pm}0.19$ mg/g 함유되었음을 확인 할 수 있었다. 또한 항생재 내성균주인 MRSA의 항균효과를 측정한 결과 MIC가 18mg/mL임을 확인 할 수 있었다. 이 연구결과는 통하여 효과적인 생산방법과 효능을 접목시켜 보다 저렴한 생산비로 대량 생산할 수 있는 방법을 개발할 수 있을 것으로 사료된다.
Objectives: To evaluate the monthly variation in the airborne $(1{\rightarrow}3)-{\beta}$-D-glucan level throughout one year and its relationship with climatic factors (temperature, relative humidity, wind speed, hours of daylight, cloud cover, and pollen counts). Methods: A total of 106 samples were collected using a two-stage cyclone sampler at five outdoor sampling locations (on top of 5 university buildings). The kinetic limulus amebocyte lysate assay was used to obtain $(1{\rightarrow}3)-{\beta}$-D-glucan levels. Results: Airborne $(1{\rightarrow}3)-{\beta}$-D-glucan levels were significantly higher in the spring, particularly in April, and temperature was significantly related to $(1{\rightarrow}3)-{\beta}$-D-glucan levels (r=0.339, p<0.05). Conclusions: $(1{\rightarrow}3)-{\beta}$-D-glucan levels may be highest in the spring, and outdoor temperature may influence $(1{\rightarrow}3)-{\beta}$-D-glucan levels.
A ${\beta}$-glucan synthase gene was isolated from the genomic DNA of polypore mushroom Sparassis crispa, which reportedly produces unusually high amount of soluble ${\beta}$-1,3-glucan (${\beta}$-glucan). Sequencing and subsequent open reading frame analysis of the isolated gene revealed that the gene (5,502 bp) consisted of 10 exons separated by nine introns. The predicted mRNA encoded a ${\beta}$-glucan synthase protein, consisting of 1,576 amino acid residues. Comparison of the predicted protein sequence with multiple fungal ${\beta}$-glucan synthases estimated that the isolated gene contained a complete N-terminus but was lacking approximately 70 amino acid residues in the C-terminus. Fungal ${\beta}$-glucan synthases are integral membrane proteins, containing the two catalytic and two transmembrane domains. The lacking C-terminal part of S. crispa ${\beta}$-glucan synthase was estimated to include catalytically insignificant transmembrane ${\alpha}$-helices and loops. Sequence analysis of 101 fungal ${\beta}$-glucan synthases, obtained from public databases, revealed that the ${\beta}$-glucan synthases with various fungal origins were categorized into corresponding fungal groups in the classification system. Interestingly, mushrooms belonging to the class Agaricomycetes were found to contain two distinct types (Type I and II) of ${\beta}$-glucan synthases with the type-specific sequence signatures in the loop regions. S. crispa ${\beta}$-glucan synthase in this study belonged to Type II family, meaning Type I ${\beta}$-glucan synthase is expected to be discovered in S. crispa. The high productivity of soluble ${\beta}$-glucan was not explained but detailed biochemical studies on the catalytic loop domain in the S. crispa ${\beta}$-glucan synthase will provide better explanations.
A bacterium K-4-3, producing $\beta$-glucan hydrolyzing enzyme, was isolated from soil and identified to be Bacillus subtilis by its morpholohical and physiological characteristics. $\beta$-glucan was coloured using cibacron blue 3G-A and cross linded by the addition of 1, 4-butanedioldiglycidyl ether. This substrate was used for the isolation of $\beta$-glucanase producing microorganism. The $\beta$-glucan hydrolyzing enzyme actibity from isolated K-4-3 strain was also measured using the modified substrate. Bacillus subtilis K-4-3 produced the highest extracellular $\beta$-glucan hydrolyzing activity in the basal medium containing $\beta$-glucan as a carbon source, peptone and tryptone as a nitrogen source, and magnesium sulfate as an inorganic salt. The optimum temperature and initial pH for $\beta$-glucanase production by Bacillus subtilis K-4-3 were $37^{\circ}C$ and pH6. The highest enzyme activity was obtained at the culture age of 54 hrs with rotary shaking at $37^{\circ}C$. The crude enzyme showed the highest activity at pH 7.5-8.0 and $65^{\circ}C$.
한국산 보리 및 귀리품종의 수용성, 불용성 및 총 ${\beta}-glucan$ 함량을 분석하여 ${\beta}-glucan$의 용해성을 조사하였다. 보리원맥의 총 ${\beta}-glucan$ 함량은 $3.3{\sim}5.6%$ 범위였으며 $65{\sim}70%$ 정맥수율로 도정하여 껍질 및 강층을 제거한 정맥의 ${\beta}-glucan$ 함량은 $3.5{\sim}7.1%$로 증가하였다. 보리원맥의 수용성 ${\beta}-glucan$ 함량은 $1.4{\sim}3.3%$의 분포였으며 총 ${\beta}-glucan$에 대한 수용성 ${\beta}-glucan$의 백분을로 나타낸 용해성(% solubility)은 $43{\sim}61%$ 범위로 총량의 약 반가량이 수용성인 것으로 나타났다. 보리정맥에 있어서는 총 ${\beta}-glucan$과 불용성 ${\beta}-glucan$ 함량은 증가한 반면 수용성 ${\beta}-glucan$은 약간 감소하는 경향을 보여 용해성이 $35{\sim}55%$로 원맥보다 다소 낮았다. 귀리는 총 ${\beta}-glucan$ 함량이 겉귀리에서 $3.1{\sim}4.0%$, groats에서 $4.0{\sim}4.8%$였으며 불용성 ${\beta}-glucan$ 함량이 $0.5{\sim}0.7%$로 보리에서 보다 훨씬 낮아 추출되어 나오는 수용성 ${\beta}-glucan$은 약 84%로 매우 높게 나타났다. 보리와 귀리는 추출초기에 빠른 속도로 ${\beta}-glucan$이 추출되었으며 귀리가 보리에 비해 추출이 보다 급격히 이루어졌는데 $2{\sim}3$시간 후에는 대부분의 수용성 ${\beta}-glucan$이 추출되었다 추출온도가 $23{\sim}45^{\circ}C$로 증가함에 따라 수용성 추출량이 증가하였으나 $65^{\circ}C$에서는 보리의 경우 추출량이 떨어졌다. 보리 및 귀리는 증자에 의한 가열처리에 의해 불용성 ${\beta}-glucan$ 함량이 증가하여 ${\beta}-glucan$의 용해성이 떨어진 반면 보리의 볶음처리에서는 ${\beta}-glucan$이 가용화됨에 따라 용해성이 증가하는 것으로 나타났다.
We examined the effects of ${\beta}$-glucan-reinforced PLGA film and scaffold on HDFs (human dermal fibroblast) attachment and proliferation. The PLGA films were prepared by simple solvent-casting method. The prepared films were grafted with $(1{\to}3)(1{\to}6)-{\beta}-glucan$ in various ratios after plasma treatment on surface. The surface of the film was characterized by contact angle measurement, scanning electron microscope (SEM), and Fourier-transform infrared spectrophotometer (FT-IR). The amount of $(1{\to}3)(1{\to}6)-{\beta}-glucan$ in the prepared film was indirectly determined by phenol-sulfuric acid method. The HDFs (Human dermal fibroblasts) were used to evaluate the cell attachment and proliferation on PLGA specimens before and after plasma/${\beta}-glucan$ treatment. The result showed that the plasma treated groups exhibited more mont of ${\beta}-glucan$ might be grafted than the non plasma treated groups. Cell attachment was significantly enhanced in the plasma/${\beta}-glucan$ grafted group after 4 hours incubation (p<0.05) due to the improved hydrophilicity and cytoactivity effect of the ${\beta}-glucan$. The cell proliferation of plasma/${\beta}-glucan$ (2mg/ml) grafted group was the highest rate among the groups (p<0.05).
Varietal and annual variations in the contents of ${\beta}$-glucan fractions per weight grain samples were examined in sixteen covered and eighteen naked barley and five oat cultivars developed in Korea. Also, the effect of pearling on ${\beta}$-glucan content was investigated. Average contents of total, soluble and insoluble ${\beta}$-glucan fractions were 5.25, 3.72, and 1.53%, respectively, in covered barley, and 5.86, 3.51, and 2.35%, respectively, in naked barley. Soluble ${\beta}$-glucan content was higher in covered barley, though total ${\beta}$-glucan content higher in naked barley. The total and insoluble ${\beta}$-glucan contents were higher in pearled grains. Total ${\beta}$-glucan content was higher in waxy barley than in non-waxy barley. Duwonchapssalbori, a two-rowed and waxy naked barley cultivar, was highest in total, soluble and insoluble ${\beta}$-glucan contents. Highly significant positive correlations were observed between total ${\beta}$-glucan and soluble ${\beta}$-glucan contents both in covered and naked barley. There were significant annual variations in total ${\beta}$-glucan content in barley. Average contents of total, soluble and insoluble ${\beta}$-glucans of oat cultivars were 4.33, 3.44, and 0.89%, respectively. Contents of all fractions of ${\beta}$-glucans were higher in barley than in oat. These results would be useful for the breeding of high ${\beta}$-glucan variety and also for the use barley and oat as valueadded food ingredients.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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