• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권6호
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• pp.479-485
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• 1986

Bacillus amyloliquefaciens가 생성하는 액화형 $\alpha$-amylase의 구조유전자를 클로닝하기 위하여 이 균주 염색체의 2 - 5kb 획분을 분리하여 Mbo I으로 부분분해한 후 pUB110플라스미드의 BamHI 부위에 삽입하여 hybrid vector pSKS3 를 제작하였다. 이 재조합플라스미드를 세한수식결손 세포인 Bacillus subtilis ED 107에서 subcloning한 후 당화형 $\alpha$-amylase를 생성하는 Bacillus subtilis NA 64의 $\alpha$-amylase결실변이주 Bacills subtilis KM 107 주에서 형질 발현시켰다. 이때 형질전환빈도는 $10^{-5}$ - $10^{-7}$정도였으며 그중 약 50%가 $\alpha$-amylase 분비능이 있었으나 거의 대부분이 쉽게 실활되었다. 최종선별과정에서 $\alpha$-amylase를 가장 강하게 생성하는 형질전환주 Bacillus subtilis KM213으로부터 재 추출한 재조합플라스미드 pSKS3는 5.7kb 삽입된 단편이 BamH I/Mbo I 부위에 결합되어 있었다. pSKS3에 클로닝된 유전자에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 활성은 B. amyloliquefaciens 활성의 약 25%였으며, 이 pSKS3에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 단백은 B.amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase와 동일한 전기영동성을 나타내었음을 볼 때 pSKS3에 클로닝된 유전자는 B. amyloliquefaciens에서 유래함을 알 수 있었다.

• 약학회지
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• 제36권4호
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• pp.390-396
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• 1992

Streptomyces minoensis DMCJ-144 isolated from soil produces the ${\alpha}-amylase$ inhibitor. Optimum culture conditions for ${\alpha}-amylase$ inhibitor production of the strain were determined in this experiment. The optimum composition of the culture medium was studied by supplementing various carbon sources, nitrogen sources, vitamins, and metal salts to the basal medium containing 1% glucose, 0.1% asparagine, 0.005% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.005% $K_2HPO_4$, 0.005% NaCl. Other culture conditions such as the culture temperature, initial pH of the medium, aeration, and culture time were also investigated. When the strain was cultured in a 100 ml flask containing 20 ml of 2% glucose, 0.5% beef extract, 0.0002% riboflavin, 0.0002% thiamine HCI, 0.01% $ZnCl_2$, 0.005% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.005% $CuSO_4{\cdot}5H_2O$, 0.005% NaCl, pH 7.2, 180 rpm at $30^{\circ}C$, the maximum production of the ${\alpha}-amylase$ inhibitor was observed after 5 days of the cultivation.

• Applied Microscopy
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• 제19권2호
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• pp.119-137
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• 1989

Turtle bladder의 상피조직(上皮組織)과 세포막(細胞膜) 투과성(透過性)을 분석하기 위하여 동결절단법(凍結切斷法)을 적용(適用)하여 전자현미경(電子顯微鏡) 관찰을 하였으며 그 결과 다음과 같이 요약(要約)된다. 1. 방광상피(膀胱上皮)의 3가지 주요세포형(主要細胞形)은 granular-cell, ${\alpha}$ 및 ${\beta}$형(形)의 CA-rich cell로서 구분된다. 2. 과립성세포(顆粒性細胞)의 주요기능(主要機能)은 $Na^+$ 재흡수(再吸收)이며, 두 단계(段階)의 수송과정(輸送過程)으로 설명되며 정단세포막(頂端細胞膜)을 통한 $Na^+$의 세포내(細胞內) 확산이동(擴散移動)과 그후 기저막(基底膜)에 위치한 $Na^{+}\;-K^{+}$ 펌프에 의한 능동수송과정(能動輸送過程)이다. 3. ${\alpha}$ 및 ${\beta}$형(形) CA-rich cell은 $Na^+$ 수송(輸送)에 관여하지 않으며, ${\alpha}$형(形)의 CA-cell은 정단세포막(頂端細胞膜)의 proton펌프를 이용하여 proton 분필(分泌)에 관여한다. 또한 ${\beta}$형(形)의 CA-cell는 정단세포막(頂端細胞膜)을 통한 $HCO_{3}^-$ 분필수송(分泌輸送)의 기능을 가지고 있다. 4. 동결절단법(凍結切斷法)의 적용하에 세포막표면(細胞膜表面)의 특성(特性)을 관찰한 바, ${\alpha}$형(形)의 CA-cell의 정단세포막(頂端細胞膜)은 proton펌프를 함유하는 것으로 보이는 intramembrane particle이 다수 관찰되고 있으며, ${\beta}$형(形) CA-cell은 기저세포막(基底細胞膜)에서 이와같은 intramembrane particle이 나타나고 있다. 5. 상술(上述)한 두 type의 CA-cell에서 수송특성(輸送特性)의 차이는 proton 및 $HCO_{3}^-$ 분필수송(分泌輸送)이 서로 반대의 방향으로 일어나는 것으로 사료된다.

• 대한수의학회지
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• 제38권4호
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• pp.712-719
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• 1998

Thyroid function is mainly regulated through cAMP and phophatidylinositol, and it is well known that TSH-stimulated thyroxine ($T_4$) release is inhibited by catecholamine from mouse thyroids via the ${\alpha}_1$-adrenoceptor stimulation. Previous study has established that the inhibition of $T_4$ release by ${\alpha}_1$-adrenoceptor stimulation results in activated protein kinase C (PKC). The purpose of this study was to determine if ion transport systems are involved in the inhibition of $T_4$ release elicited by ${\alpha}_1$-adrenergic agonist in mouse thyroids. TSH-, IBMX- and cAMP analogue-stimulated $T_4$ release were significantly inhibited by methoxamine, R59022 (diacylglycerol kinase inhibitor), and MDL (adenylate cyclase inhibitor). TSH-stimulated $T_4$ release could be inhibited by Bay K 8644 and cyclopiazoic acid, but not by verapamil and tetrodotoxin. The addition of nifedipine ($Ca^{2+}$ channel blocker), tetrodotoxin and lidocaine ($Na^+$ channel blockers), but not amiloride (EIPA) and ryanodine, completely blocked the inhibitory effects of methoxamine on $T_4$ release. TSH-stimulated $T_4$ release was also inhibited by benzamil ($Na^+-Ca^{2+}$ exchange inhibitor). TSH-, IBMX- and cAMP-stimulated $T_4$ release were inhibited by methoxamine or R59022, these effects were reversed by nifedipine. but not by verapamil. Furthermore, nifedipine reversed the inhibitory effects of benzamil and R59022 on TSH-stimulated $T_4$ release. These data suggest that the observed ${\alpha}_1$-adrenoceptor-mediated inhibition of $T_4$ release in mouse thyroids is the result of an increase in intracellular $Na^+$ or $Ca^{2+}$ effected via activation of fast $Na^+$ or nifedipine-sensitive $Ca^{2+}$ channels, and that $Na^+-Ca^{2+}$ exchange may play an important role in reducing thyroid hormone by increasing intracellular $Ca^{2+}$.

• 멤브레인
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• 제24권5호
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• pp.375-385
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• 2014

본 연구에서는 종결정 코팅층이 NaA 제올라이트 분리막 형성에 미치는 영향에 대하여 고찰하였다. NaA 제올라이트 분리막은 평균입경 100 nm 종결정을 다공성 ${\alpha}$-알루미나 표면에 진공여과 코팅하고 $100^{\circ}C$에서 24시간 수열처리하여 합성되었다. 이때 지지체 표면에 분포된 종결정 양을 조절한 후 형성된 NaA 제올라이트 분리층의 두께와 결정입 크기 등 미세구조에 미치는 영향에 대하여 고찰하였다. 종결정 코팅 양은 지지체를 통과한 종결정 수용액의 여과 양을 조절하여 제어하였다. 종결정을 단일층으로 코팅한 후 합성하였을 경우, 코팅 양이 증가함에 따라 분리층 단면에서의 두께와 균일도는 증가하였으며, 표면에서의 결정입 크기는 감소하면서 균일도는 증가하였다. 반면, 종결정을 다층으로 코팅한 후 합성하였을 경우, 균일한 분리층을 형성하였지만 단일층으로 코팅된 경우에 비하여 불균일하였으며 두꺼운 분리층이 형성되었다. 균일하고 초박형의 결함이 없는 제올라이트 분리층을 형성하기 위해서는 종결정을 균일하고 단일층으로 코팅하여야 함을 알 수 있었다. 본 연구로부터 종결정의 코팅 상태가 이차성장에 의한 NaA 제올라이트 분리층의 미세구조를 결정하는 중요한 인자임을 확인할 수 있었다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1996년도 춘계학술대회
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• pp.181-181
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• 1996

The (Na, K) ATPase is a membrane ion transporting ATPase composed of an ${\alpha}$ catalytic subunit and a ${\beta}$ glycoprotein subunit. The topology of the rat ${\alpha}$1 and ${\beta}$1 subunits has been studied by insertion of epitope(s) : at the NH2-terminus and COOH-terminus and between Glu117 and Glul18, Lys828 and Arg829, Gln900 and Trp901, and Va1939 and Phe940 of the ${\alpha}$ subunit; and at the NH2-terminus and COOH-terminus and between Glu228 and Tyr229 of the ${\beta}$ subunit. The epitope-tagged ${\alpha}$l, constructs were expressed in HeLa cells to select for stable cell lines expressing a functional (Na, K)ATPase. All constructs, except for the one tagged between Gln900 and Trp901, resulted in ouabain-resistant colonies indicating that modified proteins retained functional integrity. The epitope-tagged ${\beta}$ constructs were transiently expressed in Cos-7 cells. The orientation of the epitopes with respect to the cell membrane was revealed by indirect immunofluorescence performed on permeabilized and non-permeabilized cells expressing the (Na, K)ATPase chains. The results indicate that the ${\alpha}$ subunit has 4 transmembrane segments in the COOH terminal membrane bound domain between residues 760 and 938, and that both the NH2-terminus and the COOH-terminus are in the cytosol; it was not determined whether there are more transmembrane segments between residue 938 and the COOH-terminus. The ${\beta}$ subunit has only one transmembrane spanning region with the NH2-terminus in the cytosol and the COOH-terminus on the extracytoplasmic surface of the plasma membrane.

• KSBB Journal
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• 제15권6호
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• pp.664-669
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• 2000

미셀 집합체들이 수용액에 존재하는 혼합물로부터 아미노산, 단백질, 그리고 효소와 같은 생물학적 물질의 선돼적인 추출에 유용하게 샤용될 수 있음은 널리 알려져 있다. 본 연 구에서는 가용화 과정에 영향을 미치는 변수들을 확인하기 위하여 AOT와 iso-octane의 유기상에서의 $\alpha$-chymotrypsin 가 용화에 대하여 pH의 영향, 염의 종류와 염의 농도의 영향을 연구하였다. NaCI과 KCI에 대하여서는 pH=5.0에서 최대 효 율을 나타내며, $MgCl_2$ 와 $CaCl_2$ 에 대해서는 pH=7.0에서 최대 효율을 나타내었는데 이와 같은 조건은 모두 $\alpha$-chymo$\sigma$ypsin 의 둥전점 이하 영역이다. 낮은 pH에서는 계변에 단백질이 광범위하게 침전되거나 엉킴현상이 나타나기 때문에 유기상 에서의 단백질 농도를 직접 측정하여 실험오차를 줄였다. 미 셀의 water po이 크기는 물에 대한 계면활성제의 몰 비(Wo) 를 측정하여 추산하였다 .. 1: 1염인 NaCI과 KCI에 대하여 w。 값은 각각 30과 19로 거의 일정하고 $MgCl_2$ 와 $CaCl_2$ 의 1:2염 에 대하여서는 1: 1염의 Wo값보다 훨씬 작은 5 이하의 값을 나타내었다

• 약학회지
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• 제41권4호
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• pp.498-511
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• 1997

The effects of UK 14,304, an ${\alpha}_2$-adrenergic agonist, on renal function were investigated in dogs. UK 14,304, when given intravenousely($15.0{\mu}g/kg,\;50{\mu}g/kg$), produced the increase of urine flow accompanied with the marked augmentation of free water clearance ($C_{H_2O}$) and reabsorption rates of sodium in renal tubules ($R_{Na}$), and the remarkable decrease of osmolar clearance ($C_{osm}$) and the amounts of sodium excreted in urine ($E_{Na}$). UK 14,304 given into a renal artery($1.5{\mu}g/kg,\;5.0{\mu}g/kg$) elicited the increase of urine flow with the augmentation of $C_{H_2O}$ in both kidney. UK 14,304, when administered into carotid artery($3.0{\mu}g/kg,\;10.0{\mu}g/kg$). exhibited the same aspect as shown in intravenous UK 14.304 at smaller dose than the intravenous dose. Diuretic action of intravenous UK 14,304 were produced together with increase of $C_{H_2O}$ in situation of water diuresis too, changes of renal function in this state were the increase of $C_{osm},\;E_{Na},\;and\;E_K$ (excreted amounts of potassium in urine), and the decrease of $R_{Na}\;and\;R_K$, these were different appearances from situation of saline diuresis. Diuretic action of intravenous UK 14,304 were blocked completely by post or pretreatment of yohim-bine, ${\alpha}_2$-adrenergic blocking agents, and inhibited by pretreatment of vasopressin, antidiuretic hormone. Above results suggest that UK 14,304 produces the diuretic action by the inhibition of vasopressin secretion and suppression of electrolytes reabsorption of electrolytes in renal tubules mediated with central ${\alpha}_2$-adrenoceptor in dog.

• Molecules and Cells
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• 제20권1호
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• pp.119-126
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• 2005

${\alpha}$-Expansins are bound to the cell wall of plants and can be solubilized with an extraction buffer containing 1 M NaCl. Localization of ${\alpha}$-expansins in the cell wall was confirmed by immunogold labeling and electron microscopy. The subcellular localization of vegetative ${\beta}$-expansins has not yet been studied. Using antibodies specific for OsEXPB3, a vegetative ${\beta}$-expansin of rice (Oryza sativa L.), we found that OsEXPB3 is tightly bound to the cell wall and, unlike ${\alpha}$-expansins, cannot be solubilized with extraction buffer containing 1 M NaCl. OsEXPB3 protein could only be extracted with buffer containing SDS. The subcellular localization of the OsEXPB3 protein was confirmed by immunogold labeling and electron microscopy. Gold particles were mainly distributed over the primary cell walls. Immunohistochemistry showed that OsEXPB3 is present in all regions of the coleoptile and root tissues tested.

• 한국식품과학회지
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• 제27권6호
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• pp.909-914
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• 1995

알파-락트알부민(${\alpha}-La$)의 열처리에 의한 겔 특성을 조사하기 위하여 ${\alpha}-La$ 농도, 염의 종류와 농도, 티올시약(NEM, DTT)의 농도를 달리해 $90^{\circ}C$에서 40분간 가열하여 만든 ${\alpha}-La$의 겔형성 시간과 용해성을 측정하였다. 겔형성 시간은 ${\alpha}-La$, NaCl, $CaCl_2$, DTT의 농도가 증가할수록 감소하였으나 NEM의 경우는 그와 반대로 나타났고 ${\alpha}-La$ 용액의 겔형성은 NEM $20{\sim}50\;mM$ 경우를 제외하고는 전부 40분 내에 이루어졌다. 용해성은 ${\alpha}-La$, NaCl, $CaCl_2$, DTT의 농도가 증가함에 따라 감소하였으나 NEM의 경우는 NEM의 농도증가에 따라 용해성은 증가하는 양상을 나타내었다. 표준완충용액에 용해된 겔의 용해성은 각각 $10.4{\sim}51.3%$, $9.2{\sim}35.4%$, $11.1{\sim}35.0%$, $8.0{\sim}9.5%$, 그리고 $96.8{\sim}56.2%$였고, 8M urea와 0.5% SDS를 함유한 표준완충용액에서는 더 높은 값인 $41.8{\sim}81.3%$, $41.9{\sim}64.1%$, $43.5{\sim}69.8%$, $29.6{\sim}38.5%$, 그리고 $77.4{\sim}98.9%$로 각각 나타났다. DTT를 함유한 것은 모든 조건에서 거의 100%에 달하는 용해성을 나타내었다. 이상으로 ${\alpha}-La$의 겔형성 속도와 용해성은 여러인자 즉, 단백질 농도, 염의 종류와 농도, 티올시약의 농도 등에 의해 영향을 받고, 겔형성 속도가 증가될수록 겔의 용해성은 감소함을 알수 있었다.