• KSBB Journal
• /
• 제10권5호
• /
• pp.533-539
• /
• 1995

재조합 대장균에 의해 생합성된 PHB를 분리정제하기 위하여 박테리오파아지의 세포파괴작용을 이용하는 방법의 가능성에 대해 알아 보았다. 먼저, $cI_{857}$ 유전자를 지난 박테리오파아지 A를 대장균에 감염시킨 후 lysogen, XLl-Blue($\lambda$HL1)를 선별하고, 이 균주에 PHA 생합성 플라스미드를 도입시켜 원하는 균주인 XLI-Blue($\lambda$HL1, pSYLl05)를 만들였다. 숙주인 XLl-Blue, 열적유도에 의해 세포파괴가 가능한 XLl-Blue($\lambda$HL1), 그리고 세포파괴와 PHB 생합성이 모두 가능한 XLl-Blue(AHL1, pSYL105) 에 대하여 여러 가지 조건에서의 실험결과를 비교.검토하였다. XLI-Blue($\lambda$IL1, pSYLl05)의 경우 대수기에서는 열적유도만으로 세포파괴를 효과적으로 야기할 수 있었으나 PHB가 축적되는 정지기에서는 열척유도만으로 세포파괴를 일으킬 수 없었다. 세포 파괴를 보다 용이하게 하기 위하여 열적유도 빛 2% (v/v)의 chloroform을 사용하는 화학적용균을 병행 하였는데, 이 경우 세포파괴가 효과적으로 일어남을 관찰할 수 있었다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제31권3호
• /
• pp.219-225
• /
• 1988

Avian Sarcoma Virus의 plasmid DNA중(中)의 역 이사효소의 유전자(遺傳子)를 온도의존성(溫度依存性) 발현(發現) vector인 pPL-lambda에 cloning하여 온도(溫度)에 민감한 phage ${\lambda}$의 repressor인 cI857 gene을 갖고 있는 bacteriophage lysogen인 N4830에 transformation시켰다. transformant를 pL promoter의 발현(發現)을 억제(抑制)하는 저온(低溫)$(28^{\circ}C)$에서 배양(培養)시킨 뒤, 이 repressor를 억제(抑制)하여 transcription을 촉진(促進)하게 하는 고온(高溫)$(42^{\circ}C)$에서 배양(培養)시킨 다음 균체(菌體)를 회수(回收)하여 RNA를 추출(抽出)하고 분석(分析)을 한 결과(結果) 도입(導入)된 역전사 효소 유전자(遺傳子)의 전사(轉寫)가 고온(高溫)에서 증대(增大)되었다.

• BMB Reports
• /
• 제42권3호
• /
• pp.160-165
• /
• 2009

The temperate Staphylococcus aureus phage ${\Phi}11$ harbors cI and cro repressor genes similar to those of lambdoid phages. Using extremely pure ${\Phi}11$ Cro (the product of the ${\Phi}11$ cro gene) we demonstrated that this protein possesses a single domain structure, forms dimers in solution at micromolar concentrations and maintains a largely $\alpha$-helical structure even at $45^{\circ}C$. ${\Phi}11$ Cro was sensitive to thermolysin at temperatures ranging from $55-75^{\circ}C$ and began to aggregate at ${\sim}63^{\circ}C$, suggesting that the protein is moderately thermostable. Of the three homologous 15-bp operators (O1, O2, and O3) in the ${\Phi}11$ cI-cro intergenic region, ${\Phi}11$ Cro only binds efficiently to O3, which is located upstream of the cI gene. Our comparative analyses indicate that the DNA binding capacity, secondary structure and dimerization efficiency of thermostable ${\Phi}11$ Cro are distinct from those of P22 Cro and $\lambda$ Cro, the best characterized representatives of the two structurally different Cro families.

• 한국미생물학회:학술대회논문집
• /
• 한국미생물학회 1991년도 춘계학술발표대회 논문집
• /
• pp.82-96
• /
• 1991

To understand the mechanism of illegitimate recombination in mammalian cells, we have examined the recombination role of DNA topoisomerase II (Topo II ). We found that purified calf thymus Topo II mediates recombination between two phage $\lambda$ DNA molecules in an in vitro system. The enzyme mainly produced a linear monomer recombinant DNA that can be packaged in vitro. Novobiocin and anti-calf thymus Topo II antibody inhibit this ATP-dependent recombination. The recombinant molecules contain duplications or deletion, and most crossovers take place between nonhomologous sequences of $\lambda$ DNA, as judged by the sequences of recombination junctions. In order to study the effects of Topo II on illegitimate recombination in mammalian cells, we have developed a new shuttle vector, pNKl, which contains three bacterial genes, amp(APR), galK and neo($Km^R$). Using this system, we have shown that a Topo II inhibitor, VM26, stimulated deletion formation in pNK1 DNA in monkey COS1 cells. Both in vitro and in vivo results suggest that Topo II participates in illegitimate recombination in mammalian cells.

• Journal of Microbiology
• /
• 제34권2호
• /
• pp.166-171
• /
• 1996

Genetic analysis was conducted on newly isolated coliphages form soil by using a RAPD assay. From the initial result, the coliphages were turned out to be different form one another but were closely related to .psi..lambda. due to the fact that they shared the samed RAPD maker in which other T phage testings failed to show. By using the primers EC01 or EC02, a fast genetic mutation of .psi.C1 was found by producing specific RAPD markers on the phages from the first filial progeny to the second filial progeny. When we made a RAPD assay with combined primers (EC01, EC05 and EC08), the genetic mutation was again confirmed in .psi.C1. The assay detection showed mutations in other coliphages such as .psi.C2 and .psi.C3 by revealing specific RAPD bands among different progeny phages, where genetic instability of the coliphages in implied.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제14권2호
• /
• pp.181-186
• /
• 1986

대장균 염색체의 acetyl CoA carboxylase (fabE)영역 (염색체 지도상 72분 영역)의 유전자를 가진 결함형질도입 파아지를 분리했다 이 형질도입 파아지로부터 20 Md의 염색체 유래의 DNA를 분리하여 제한효소 지도를 작성했으며 이 영역에는 제한효소 Eco RI의 절단부위는 없었다. 형질도입 파아지 DNA의 제한효소 분해산물들은 pACYC 184 플라스미드 벡터에 재클로닝하여 fab E의 온도감수성 변이를 회복할 수 있는 수 종류의 플라스미드를 분리했다. 이들 플라스미드를 분석하여 fab E 유전자는 7, 4Md Bel II 단편상의 Hind III의 절단부위를 가진 3.4 Md Ban HI-Sal I 단편내에 존재함을 밝혔다.

• 미생물학회지
• /
• 제32권1호
• /
• pp.47-52
• /
• 1994

Campylobacter jejuni에 48${\circ}C$의 열충격을 30분간 주었을 때, HSP90, HSP66, HSP60의 열충격 단백질들이 합성되었고, 이 단백질들은 각각 E. coli의 hsp87, HSP66 (DnaK), HSP58(GroEL)에 상응하는 단백질들이었다. 여러가지의 제한효소로 처리한 C. jejuni의 chromosomal DNA에 E. coli의 groEL(4.0kb)을 probe로 사용하여 Southern hybridization한 결과, 이들과 상동성을 가지는 유전자들이 있음을 확인하였다. C. jejuni의 groEL 유전자를 pWE15 cosmid를 이용하여 recombinant plasmid pLC1을 만들고, 이를 E. coli B178 groEL44 ts mutant에 형질전환시켜 E. coli LC1을 얻었다. 이 pLC1에는 groEL 유전자가 존재하는 5.7kb인 insert DNA가 포함되어 있었고, 그로부터 subcloning한 pLC101에는 groEL을 포함하는 4.0kb의 DNA가 삽입되어 있었다. 이 recombinant plasmid들이 형질전환된 E. coli LC1과 LC101 균주에서는 C. jejuni의 GroEL 단백질이 과다 생산되었다. C. jejuni의 groEL이 cloning된 E. coli LC1은 42${\circ}C$에서의 생장능력이 회복되었고, ${\lambda}$ vir phage에 대한 감수성도 회복되는 등의 chaperon 효과가 입증되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제19권5호
• /
• pp.433-438
• /
• 1991

Phenylalanine 고생산용 plasmid pSY130-14는 $\lambda$-phage 유래 온도감수성을 가지고 있으므로 $cI_{857}$ repressor와 PL과 PR을 온도를 올려 phenylalanine의 생산을 유도한다. pSY130-14를 갖는 E.coli AT2471은 kanamycin 무첨가, $38.5^{\circ}C$, 48시간에서 약 30%로 plasmid가 없어지며 첨가에서 안정성이 떨어졌다가 배양시간과 더불어 올라갔는데, 이것은 생육에 피요한 kanamycin gene과 ori만이 남는 것으로 생각된다.

• BMB Reports
• /
• 제37권3호
• /
• pp.356-361
• /
• 2004

To develop a simplified method that can rapidly prepare DNA microarray probes in a massive scale, a lambda phage genomic DNA-fragments library was constructed for the microarray-probes collection. Four methods of DNA band recovery from the first PCR products were tested and compared. The DNA microarray probes were collected by a novel method of nested PCR that was mediated by gel isolation of the first PCR products. This method was named GIN-PCR. The probes that were prepared by this GIN-PCR technique were used as subjects to fabricate a DNA microarray. The results showed that a wooden toothpick was superior to the other 3 methods, since this technique can steadily transfer the DNA bands as the template of the second PCR after the first PCR. A group of probes were successfully collected and DNA microarrays were constructed using these probes. Hybridization results demonstrated that this technique of DNA recovery and probe preparation was rapid, efficient, and effective. We developed a cost-effective and less labor-intensive method for DNA microarray probe preparation by nested PCR that is mediated by wooden toothpick transfer of the DNA bands in the gel after electrophoresis.

• 미생물학회지
• /
• 제31권2호
• /
• pp.123-128
• /
• 1993

해녀콩 뿌리혹의 질소고정 공생균인 Rhizobium sp. SNU003 균주의 게놈내 7.9 kb 의 EcoRI, 6.5kb 의 SalI, 7.3 kb 의 HindIII 와 4.4 kb 의 PstI 절편에 nifHD 가 존재함을 확인하였다. 람다파아지 EMBL3-BamHI arm 을 사용하여 genomic library 를 제조하였으며 이로부터 nif-유전자를 포함하고 있는 9개의 재조합 파아지 클론을 선별하였다. 이들 중 15.3 kb 의 삽입 DNA 를 가지고 있는 Rnif-6 클론은 7.6 kb 의 BamHI/SacI 절편에 nifHD 가 위치하고 있었다. 따라서 이절편을 pUC19 에 sub cloning 하고 제한효소 지도를 작성한 결과 Rhizobium sp. SNU003 의 nifH 와 nifD 는 4.5 kb 의 BamHI/BglII 절편에 연속배열하고 있다.