감나무 잎으로 부터 분리한 tyrosinase 억제물질의 응용

Application of Isolated Tyrosinase Inhibitory Compounds from Persimmon Leaves

감잎으로부터 tyrosinase 억제물질의 추출을 위하여 60% ethanol을 사용하여 추출한 경우 추출물의 phenol성물질 함량이 21.91 mg/g로 가장 높았고, tyrosinase 억제효과도 37%의 억제율로 가장 높게 나타났다. 감잎 추출물로부터 tyrosinase 저해 활성 물질을 정제하기 위하여 Sephadex LH-20 column과 MCI-gel CHP-20 column을 이용하여 gradient로 용출한 결과 tyrosinase 저해 활성을 가지는 2가지 순수한 compound를 정제하였으며, 정제된 2가지 compound를 구조 동정한 결과, (+)-gallocatechin과 prodelphinidin B-3이었다. 정제물의 tyrosinase 저해활성을 측정한 결과 (+)-gallocatechin과 prodelphinidin B-3는 29.5, 40.2%의 저해활성을 나타내었으며, melanoma 세포에서의 멜라닌 생합성 저해효과를 측정한 결과 (+)-gallocatechin과 prodelphinidin B-3는 각각 32.5, 46.7%의 저해활성을 나타내어 멜라닌생성억제효과가 매우 뛰어남을 알 수 있었다. 정제된 미백물질을 이용하여 제조한 essence 제품의 안정성을 살펴본 결과, 미백 essence제품의 pH는 10,000 ppm의 농도에서 4.90~4.95였으며, 점도는 23,000~26,000 cP로 60일 동안의 저장기간 동안 큰 변화를 나타내지 않았다. 일반적 보존 시험인 온도에 따른 안정성과 광안정성(인공광, 자연광) 검사에서도 안정하였으며, 특수, 가혹 보존 시험인 온도순환에 따른 안정성 검사에서도 상의 분리와 변색, 변취 없이 모두 안정함을 확인할 수 있었다.

Total phenolic content was the highest in 60% ethanol extracts at 21.91 mg/g, and inhibitory activity against tyrosinase of 60% ethanol extracts was higher than ethanol extracts of other concentration. The inhibitory compounds against tyrosinase from Persimmon leaves were purified using Sephadex LH-20, MCI-gel CHP-20 column chromatography with gradient elution. Two purified compounds were isolated as a result. The chemical structures of each compound were determined and identified using $^1H$-NMR and $^{13}C$-NMR, FAB-Mass. The compounds were confirmed as (+)-gallocatechin and prodelphinidin B-3. The tyrosinase inhibitory activities of purified (+)-gallocatechin and prodelphinidin B-3 were 29.5 and 40.2%, respectively. The inhibitory activities of (+)-gallocatechin and prodelphinidin B-3 against melanin biosynthesis in melanoma cell were 32.5 and 46.7%. The safety of essence with tyrosinase inhibitory compounds from persimmon leaves was also assessed by various safety profiles. First, changes in pH (4.90~4.95) and viscosity (23,000~26,000 cP) was not detected for 60 days. Essence also showed stability against temperature and light for 60 days. All these findings suggest that extracts from persimmon leaves have a great potential as a cosmetical ingredient with a potent whitening effect.