Abstract
Chloramphenicol is one of the most effective antibiotics for treatment of food-producing animals for typhoid fever. However, it has been reported that it caused severe side effects such as aplastic anemia in human, therefore the use of chloramphenicol for food-producing animal is prohibited by European Union and other countries. In this study, the analytical method using isotope dilution liquid chromatography-mass spectrometry (ID-LC/MS) was established for accurate determination of chloramphenicol in meat. Chloramphenicol was extracted with ethylacetate from porcine and solid phase extraction cartridge was used for enhancing the recovery. The residue of chloramphenicol in porcine was analyzed using the liquid chromatography mass spectrometer (LC/MS) interfaced with electrospray ionization source. Analysis was performed in negative mode with selected reaction mornitoring mode at m/z 321${\rightarrow}$257 of $[M-H]^-$ ${\rightarrow}$ $[M-H-(HCOCl)]^-$ and m/z 326 ${\rightarrow}$ 262 channels for its isotope. The established method was tested using fortified samples at the level of 0.2 1, 10, $25\;{\mu}g$/kg and analytical results agreed with the gravimetrically fortified values within their uncertainties. This method was validated by analyzing a certified reference material, BCR 445, from IRMM (Institute for Reference Materials and Measurement). Our measurement values agreed with the certified value within their uncertainties. The uncertainty of our measured value was much lower than that the certified value from IRMM.
클로람페니콜은 미생물과 박테리아들의 활동을 억제시킴으로써 동물 치료에 효과적인 축산 항생제 중의 하나이다. 그러나 사람에게 재생 불량성 빈혈과 같은 치명적인 부작용이 발생하여 식용으로 사육하는 동물들에 대한 클로람페니콜의 사용을 유럽을 포함한 많은 나라에서 금지하였다. 본 연구에서는 돼지고기 시료 중 클로람페니콜을 분석하기 위하여 동위원소희석 액체크로마토그래피-질량분석법(IDLC/MS/MS)을 이용하여 정확하고 정밀한 정량분석을 하였다. 돼지고기 시료중의 클로람페니콜은 에틸아세테이트로 추출하였으며, 회수율을 높이기 위하여 고체상 추출법(Solid Phase Extraction)을 이용하였다. 액체크로마토그래피/질량분석기는 전기 분무 이온화 장치(Electrospray Ionization, ESI)를 장착하여 음이 온 모드로 선택반응분석법(Selected Reaction Monitoring mode)에서 수행하였다. 클로람페니콜의 분자이온 $[M-H]^-$이온이 조각이온인 $[M-H-(HCOCl)]^-$로 가는 m/z 321 ${\rightarrow}$ 257와 동위원소의 m/z 326 ${\rightarrow}$ 262 채널을 선택하여 분석하였다. 클로람페니콜을 약 0.2, 1, 10, $25\;{\mu}g$/kg의 농도가 되도록 첨가한 돼지고기 시료로부터 제조값과 측정 분석값을 비교하여 검토한 결과, 측정값들은 불확도 범위 내에서 제조값과 일치함을 보였다. 또한 IRMM(Institute for Reference Materials and Measurement)의 클로람페니콜 분석용 돼지고기 시료인 인증 표준물질 BCR 445를 분석한 결과, 본 실험의 측정값은 불확도 범위 내에서 인증값과 일치함을 보였으며 불확도의 경우에는 IRMM이 제공한 값보다 훨씬 향상된 값을 보였다.
