Preanalytical Stability of Adrenocorticotropic Hormone Depends on Time to Centrifugation

전혈에서 시간과 온도에 따른 Adrenocorticotropic Hormone의 안정성 평가

Background: Preanalytical factors can affect reliability of hormone assay results. Adrenocorticotropic hormone (ACTH) in blood is considered highly unstable because of proteolytic degradation, so storage of blood samples on ice until analysis is recommended. In clinical practice, however, this procedure may present logistical problems because most samples for ACTH measurement must be shipped from the place of sample collection to the laboratory. Therefore, we studied the impact of time and temperature before plasma separation and analysis on the results of ACTH assays. Methods: A total number of 22 patients were enrolled in this study. We obtained 2 blood samples. ACTH concentrations were 35~126 pg/mL. ACTH concentrations were measured by immunoradiometric assay (IRMA) using commercial kits (CIS Biointernational, Gif-sur-Yvette, France). Results: ACTH levels showed a significant difference between the samples of $22^{\circ}C$ EDTA and $4^{\circ}C$ EDTA. Measured ACTH concentrations significantly decreased with time before freezing at $-20^{\circ}C$. ACTH levels showed no significant difference between the groups of after storage for 24 hr without centrifugation at $22^{\circ}C$ and $4^{\circ}C$. Conclusion: We recommend that blood samples be obtained on pre-chilled EDTA collection tubes. The shortest possible time between sample collection and processing is always the best laboratory practice.

목적: 호르몬검사에서 채혈 후, 신속한 혈장분리의 과정은 검사결과의 신뢰성에 영향을 줄 수 있다. 혈중의 Adreno Corticotropic Hormone (ACTH)은 단백질의 분해에 의해 매우 불안정한 것으로 알려져 있다. 본 연구는 ACTH검사에서 ethylenediaminetetra-acetic acid (EDTA) tube의 온도가 환자 결과에 미치는 영향과 전혈에서 시간과 온도에 따른 ACTH의 안정성을 평가하였다. 방법: 전체 22명의 검체를 대상으로 하였으며, 냉장상태의 EDTA tube와 실온상태의 EDTA tube에 채혈한 후(n=18), 즉시 원심분리하여 두 그룹 간의 ACTH 결과를 비교하였다. 전혈상태의 EDTA 검체를 일정량을 나누어 분주하여, 실온에서 2시간(n=11), 4시간(n=11), 24시간(n=7), 냉장에서 24시간(n=7) 동안 방치한 후 원심분리하여 ACTH 농도를 측정하였다. 냉장 EDTA에 채혈 후 즉시 원심분리된 검체의 ACTH 결과와 실온에서 2시간, 4시간 방치된 검체의 ACTH결과를 비교하였고, 냉장에서 24시간 방치된 결과와 실온에서 24시간 방치된 결과를 비교하였다. 통계적인 분석은 paired t-test를 이용하였다. 결과: 실온상태의 EDTA tube에 채혈한 ACTH 결과가 냉장상태의 EDTA tube에 채혈한 결과보다 유의하게 낮게 나타났다(p=0.018). 채혈 후 즉시 원심분리된 ACTH 결과와 비교하여 실온에서 2시간 방치된 결과가 유의하게 낮았고 (p<0.001), 실온 2시간과 실온 4시간 사이에는 유의한 차가 없었다(p=0.907). 24시간 동안 방치된 결과를 보면, 실온보관과 냉장보관에서 유의한 차가 없었다(p=0.474). 결론: ACTH 검사 시에는 냉장고에 넣어둔 EDTA tube의 사용이 권장되며, 채혈 후 2시간 동안 실온에서 방치될 경우 결과가 유의하게 감소되므로, 신속한 원심분리가 요구된다.