Response of Ascorbate Peroxidase and Dehydroascorbate Reductase in Lettuce (Lactuca sativa L.) Leaves Exposed to Cold Stress

저온 처리한 상추의 잎 내에서 ascorbate peroxidase와 dehydroascorbate reductase의 반응

To investigate the relationship between cold stress and the activity of ascorbate peroxidase(APX), dehydroascorbate reductase (DHAR), mRNA expression level of two enzymes, hydrogen peroxide content was studied in lettuce leaves under stress condition imposed by cold stress at $4^{\circ}C$ for 24 hr in the dark and following recovery at $20^{\circ}C$ from cold stress. Hydrogen peroxide content increased gradually in lettuce leaves during cold stress, but decreased slightly following recovery from cold stress. Soluble protein content, however, decreased gradually during cold stress, and then rapidly returned to normal levels following recovery. Total chlorophyll content decreased gradually during cold stress, and then keep constant following recovery. The patterns of chlorophyll a and b content similar to that of total chlorophyll content, and carotenoid content didn't change. The ratio of chlorophyll a and total chlorophyll was increased during cold stress, but decreased with rapid during cold stress, and then the ratio returned to normal levels following recovery. During cold stress, the activity of APX and DHAR in the lettuce leaves increased dramatically, and also transcript levels of mRNA of APX and DHAR, as determined by probing 32P-labeled single stranded RNA of APX and DHAR, highly increased and returned to normal levels following recovery, respectively. Relationship between APX and DHAR activity and hydrogen peroxide highly related ($R^2$=0.8715 and 0.8643), whereas between hydrogen peroxide and total chlorophyll content and soluble content related reversely ($R^2$=0.5021 and 0.8915).

상추식물에서 저온 처리를 하였을 때 저온 적응성 획득 메카니즘과 관련된 APX와 DHAR의 활성도와 mRNA 발현 수준 등과의 관련성을 조사한 결과는 다음과 같다. 잎 조직내 과산화수소의 함량은 일정하게 증가하다가 $20^{\circ}C$에서 저온처리를 회복시키면 그 함량이 정상상태로 회복하는 경향을 보였으나 단백질의 함량은 반대의 경향을 나타내었다. 엽록소의 함량은 저온스트레스를 처리할 경우 엽록소 a와 b 및 총 엽록소의 함량이 점차 감소하는 경향을 보였으며 저온스트레스 회복 시 다시 증가하는 경향을 보였으나 카로티노이드 함량의 변화는 거의 일어나지 않고 일정한 수준을 유지하는 것으로 나타났다. 총 엽록소에 대한 엽록소a의 비율은 저온처리 12시간까지는 증가하다가 24시간 이후 급격하게 감소하게 되고 저온스트레스를 회복시켰을 때 정상 수준으로 회복되는 경향을 나타내었다. APX와 DHAR의 활성도는 저온 처리가 진행됨에 따라 상추의 잎 조직 내에서 급격하게 증가하는 경향을 보이고 있으나 적온으로 회복시키면 정상 수준으로 유지되었다. 저온처리 시간이 경과함에 따라 APX와 DHAR의 mRNA의 발현 수준이 크게 증가하는 경향을 보였다가 원래 수준으로 회복되었다. APX의 활성도와 과산화수소의 함량과의 상관관계는 상추의 잎 조직 내 과산화수소의 함량이 증가하면 APX의 활성도가 증가하는 경향 ($R^2$=0.8715)을 보였으며, DHAR의 활성도와 과산화수소의 함량도 동일한 경향으로 증가($R^2$=0.8643)하였다. 그러나 과산화수소의 생성량이 증가함에 따라 엽록소의 함량과 단백질의 함량은 저온 스트레스처리로 과산화수소의 생성량이 증가하면 엽록소의 함량($R^2$=0.5021)과 수용성단백질의 함량과는 감소하는 경향($R^2$=0.8915)을 보였다.