Isolation and Identification of Inhibitory Compound from Crataegi Fructus on ${\alpha}-amylase$ and ${\alpha}-glucosidase$

산사(Crataegi Fructus) 추출물로부터 ${\alpha}-amylase$와 ${\alpha}-glucosidase$ 저해 물질 분리 및 동정

The objective of this research was to evaluate the inhibitory activities of phenolic compounds isolated from Crataegi Fructus on ${\alpha}-amylase$ and ${\alpha}-glucosidase$. The content of total phenolic compounds of water extract from Crataegi Fructus was 22.5 mg/g. The inhibitory activity of the water extract (200 ${\mu}g/ml$) from Crataegi Fructus on ${\alpha}-amylase$ and ${\alpha}-glucosidase$ was determined to be 100% and 82.6%, respectively. Isolation of inhibitory compounds was carried out on Sephadex LH-20 and MCI-gel CHP-20 column chromatography using a gradient elution procedure of increasing MeOH in $H_2O$. The chemical structure of the inhibitory compound against ${\alpha}-amylase$ and ${\alpha}-glucosidase$ was confirmed as chlorogenic acid by spectroscopic analysis of FAB-MS, NMR and IR spectrum.

산사 추출물로부터 ${\alpha}-amylase$, ${\alpha}-glucosidase$ 저해활성을 탐색하고 Sephadex LH-20($5{\times}45$ cm)와 MCI-gel CHP-20를 이용하여 저해활성 물질을 정제하고 구조분석을 하였다. 산사 추출물의 페놀화합물의 함량은 물 추출물에서 22.5 mg/g, 60% ethanol 추출물에서 19.2 mg/g으로 나타났으며, 산사 물 추출물 (200 ${\mu}g/ml$)에서 ${\alpha}-amylase$, ${\alpha}-glucosidase$ 저해활성이 각각 100%와 82.6%로 나타났으나, 60% ethanol 추출물(200 ${\mu}g/ml$)에서는 ${\alpha}-glucosidase$ 저해활성이 12%로 낮은 저해활성을 나타내어 산사 물 추출물을 Sephadex LH-20를 이용하여 분획한 결과 I, II, III, IV의 4가지 분획물을 획득하고 다시 Sephadex LH-20과 MCI-gel을 이용하여 nomal phase type인 $EtOH{\rightarrow}H_2O$와 reverse phase type인 $H_2O{\rightarrow}MeOH$로 유기용매의 농도를 증가 시키며 용출하여 A, B, C, D의 compounds를 얻었다. 4가지 compound 중 compound C(200 ${\mu}g/ml$)가 ${\alpha}$-amylase, ${\alpha}$-glucosidase 저해활성이 각각 97.6%, 97.7%로 가장 높게 나타났으며, FAB-MS, NMR과 IR spectrum을 분석한 결과 chlorogenic acid로 동정되었다.