Abstract
The aim of this study was to identify the bacteria isolated from acute endodontic lesions by cell culture and 16S rDNA sequencing. The necrotic pulpal tissue was collected from 17 infected root canals, which were diagnosed as being either an acute pulpitis or acute periapical abscess. Samples were collected aseptically from the infected pulpal tissue of the infected root canals using a barbed broach and a paper point. The cut barbed broaches and paper points were transferred to an eppendorf tube containing 500 ul of 1 XPBS. The sample solution was briefly mixed and plated onto a BHI-agar plate containing $5\%$ sheep blood. The agar plates were incubated in a $37^{\circ}C$ anaerobic chamber for 7 days. The bacteria growing on the agar plate were identified by 16S rRNA coding gene (rDNA) cloning and sequencing at the species level. Among the 71 colonies grown on the agar plates, 56 strains survived and were identified. In dental caries involving the root canals, Streptococcus spp. were mainly isolated. Actinomyces, Clostridia, Bacteroides and Fusobacteria were isolated in the periapical lesion without dental caries. Interestingly, two new Actinomyces spp. (ChDC B639 and ChDC B631) were isolated in this study. These results showed that there was diversity among the species in endodontic lesions, This suggests that an endodontic infection is a mixed infection with a polymicrobial etiology. These results may offer the bacterial strains for pathogenesis studies related to an endodontic infection.
치아우식증 및 치주질환에 이환 여부와 치근단 병소의 존재 유무에 따라 급성 치수염 또는 급성 치근단 농양이라고 진단된 17개 치아의 치관부 치수를 제거하고, 치근에 존재하는 괴사된 치수 및 농양부위의 샘플을 채취하여, 혐기성 상태에서 세균을 배양하고, 이들을 16S rDNA 클로닝 및 핵산염기서열결정법으로 종 수준에서 동정하였다. 그 결과 17개의 치근관감염 병소에서 모두 71개의 세균 군락이 자라났으며, 그 중 계대 배양을 통해서 적응하여 자라난 것이 56 균주였다. 치아우식증에 의한 치근관 감염 병소와 치아우식증이 아닌 다른 원인에 의한 치근관 감염 병소에서 검출되는 세균은 서로 다른 양상을 보였다. 즉, 치아우식증에 의한 치아의 치근관 감염 병소에서 연쇄상구균들이 $72.7\%$(8/11)로 가장 많은 빈도로 검출되었다. 반면에 치아우식증이 없는 치아의 치근관 감염 병소에서는 Actinomyces속의 균주들이 $66.7\%$로 가장 높은 빈도로 검출되었다. 치근단 병소가 있는 경우의 치근관 감염 병소에는 대체로 혐기성 세균인 Clostridia 아문, Bacteroides 문, Fusobacteria 문의 균주들이 검출되었지만, 치근단 병소가 없는 치아에서는 검출되지 않았다 반면에 치근단 병소가 없는 치근관 병소에서는 연쇄상구균($60\%$)과 Actinomyces속($50\%$)의 균주들이 높은 빈도로 검출되었다. 본 연구에서는 아직까지 종 수준에서 동정되지 않은 2 균주(ChDC B639 및 ChDC B631)의 Actinomyces속에 속하는 균주가 분리되었다. 이상의 결과를 종합할 때, 세균배양법에 의한 치수 및 치근단 감염 병소에서는 다양한 세균이 검출되었으며, 이는 치근관 감염이 여러 세균에 의해 발병 및 진행된다는 기존의 연구 결과와 동일함을 알 수 있었다. 또한 본 연구 결과 분리 동정된 균주들은 치근관질환과 이와 관련된 세균간의 역학조사에 중요한 자원으로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
