Amylocolatosis sp.가 생산하는 항암물질의 정제 및 구강암 모델에 미치는 항암 효과

Purification of Materials Produced by Amylocolatosis sp. and Anticancer Effect in Oral Cancer Model

각종 토양시료로부터 M배지와 AMP배지에서 생육하는 500여종의 방선균을 분리하였으며, 그 중 전배양배지(GMY 배지)에서 가장 뛰어난 항암활성능을 소유한 균주를 불리하고 배양하여 세포외 항암성물질을 분리하여 이 물질을 완전정제하고 MTT 정량분석을 실시하여 암세포에 대한 세포독성검사를 실시하였다. 1. 정제는 배양한 균체를 완전히 제거하고 동량의 ethylacetate를 처리하여 배양액중의 항암성분을 추출하고 무수 magnesium sulfate로 건조 후 농축, ethanol로 용해, 10배량의 water을 첨가하여 $4^{\circ}C$에서 overnight 시킨 후 추출액을 원심분리(12,000 rpm, 30분)하여 methylene chloride로 용해시켜 silica gel 60 column(${\phi}35{\times}600mm$, Merck Co.), methylene chloride-ethanol(96:4) 용매로 용출하고 sephadex LH-20 column(${\phi}15{\times}300mm$, Pharmacia LKB)에서 100% methanol로 용출하여 HPLC(Waters, ODS)를 이용하여 최종적으로 완전 정제하였다. 2. Compound는 Gram(+) 세균(6균주), Gram(-) 세균(11균주), 효모(2균주), 곰팡이(1균주)에 대하여 항균 효과를 나타내었다. 3. 완전 정제된 물질에 대한 항암효과를 측정한 결과, 모든 실험 암세포에 대해서 뛰어난 항암효과를 나타내었으며 protein성 물질은 아닌 것으로 추정되었다.

A methylotrophic Actinomycetes strain, which produce the anti-oral cancer activity compound, was isolated from soil and estimated as Amylocolatosis sp. based on taxonomic studies. A methanol didn't have influence on the production of the anticancer compounds. These compound were isolated by ethylacetate extract, silica gel column chromatography, sephadex LH-20 column and reverse phase HPLC. The compounds were very stable under heat ($121^{\circ}C$), acid(pH 2.0) and alkali(pH 11.0) treatment. The cytotoxic effect of isolated anticancer compounds on various cancer cell lines such as A549, SNU-1, KB, L1210, and Sarcoma 180 was investigated by MTT assay method. And these produced compounds also showed the broad antimicrobial spectrum to test strains such as bacteria and yeast.