Vibrio furnissii로부터 세포외 용혈소의 정제 및 특성

Purification and Characterization of the Extracellular Hemolysin of Vibrio furnissii

병원성 비브리오 속인 Vibrio furnissii의 용혈소를 분리정제하고 그 물리화학적 특성, 생물학적인 그리고 면역학적인 상호관련성을 검토하여, 다음과 같은 결과를 얻었다. 용혈소의 정제는 ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 (1st와 2nd)와 Sephaedx G-100 gel permeation chromatography를 거쳐 738배로 정제되었으며 회수율은 각각 $11.6\%$ 와 $5.2\%$로 나타났다 전기영동법으로 용혈소의 정제를 확인한 결과 단일 밴드의 형성을 관찰할 수 있었다. 분자량은 61 kDa이였으며 또한 SDS-PAGE 결과 subuint는 존재하지 않았다. 정제된 용혈소는 열에 불안정한 이열성 용혈소이며 $Cu^{2+},\;Zn^{2+}$와 cholesterol에 의해 용혈활성이 모두 저해되었다. 용혈기작에 있어서는 온도의존성 용혈기작으로서 최적 용혈의 온도는 $37^{\circ}C\sim47^{\circ}C$로 나타났다. 정제용혈소의 pH 안정성은 pH 6.0, 6.5, 10.0에서 각각 불안정하였다. 용혈활성에 있어서 최적 혈구 농도는 $1.0\sim2.0\%$였다. 또한 각종 동물 혈구의 감수성 시험 결과 두 용혈소 모두 토끼에서 가장 감수성이 높았으며 사람의 혈구에서는 B형 혈액형에서 다소 높은 감수성을 나타내었다.

The extracellualr hemolysin produced by pathogenic Vibrio furnissii was isolated and purified by ammonium sulfate precipitation and followed by DEAE-Sephadex A-50 (1st and 2nd) ion-exchange and Sephadex G-100 gel permeation chromatography. The molecular weight of the purified hemolysin was 61 kDa. The enzyme activity was inactivated by heating at 60 for 5 min, and inhibited by additions of $Cu^{2+},\;Zn^{2+}$ and a high concentration of cholesterol. Lysis of human erythrocytes by the enzyme was temperature dependent, and optimal temperature of the enzyme was $37^{\circ}C$. The purified hemolysin was unstable at pH 6.0, 6.5 and 10.0. The optimal concentration of human erythrocytes on hemolysins was about $1.5\%$. The purified hemolysin was active for erythrocytes from three animal species including mouse, rabbit and rat, and was the most active against rabbit erythrocytes. B blood group of human erythrocytes also showed a high sensitivity to the enzyme.