Purification and Characterization of the Extracellular Hemolysin of Vibrio furnissii

Vibrio furnissii로부터 세포외 용혈소의 정제 및 특성

The extracellualr hemolysin produced by pathogenic Vibrio furnissii was isolated and purified by ammonium sulfate precipitation and followed by DEAE-Sephadex A-50 (1st and 2nd) ion-exchange and Sephadex G-100 gel permeation chromatography. The molecular weight of the purified hemolysin was 61 kDa. The enzyme activity was inactivated by heating at 60 for 5 min, and inhibited by additions of $Cu^{2+},\;Zn^{2+}$ and a high concentration of cholesterol. Lysis of human erythrocytes by the enzyme was temperature dependent, and optimal temperature of the enzyme was $37^{\circ}C$. The purified hemolysin was unstable at pH 6.0, 6.5 and 10.0. The optimal concentration of human erythrocytes on hemolysins was about $1.5\%$. The purified hemolysin was active for erythrocytes from three animal species including mouse, rabbit and rat, and was the most active against rabbit erythrocytes. B blood group of human erythrocytes also showed a high sensitivity to the enzyme.

병원성 비브리오 속인 Vibrio furnissii의 용혈소를 분리정제하고 그 물리화학적 특성, 생물학적인 그리고 면역학적인 상호관련성을 검토하여, 다음과 같은 결과를 얻었다. 용혈소의 정제는 ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 (1st와 2nd)와 Sephaedx G-100 gel permeation chromatography를 거쳐 738배로 정제되었으며 회수율은 각각 $11.6\%$ 와 $5.2\%$로 나타났다 전기영동법으로 용혈소의 정제를 확인한 결과 단일 밴드의 형성을 관찰할 수 있었다. 분자량은 61 kDa이였으며 또한 SDS-PAGE 결과 subuint는 존재하지 않았다. 정제된 용혈소는 열에 불안정한 이열성 용혈소이며 $Cu^{2+},\;Zn^{2+}$와 cholesterol에 의해 용혈활성이 모두 저해되었다. 용혈기작에 있어서는 온도의존성 용혈기작으로서 최적 용혈의 온도는 $37^{\circ}C\sim47^{\circ}C$로 나타났다. 정제용혈소의 pH 안정성은 pH 6.0, 6.5, 10.0에서 각각 불안정하였다. 용혈활성에 있어서 최적 혈구 농도는 $1.0\sim2.0\%$였다. 또한 각종 동물 혈구의 감수성 시험 결과 두 용혈소 모두 토끼에서 가장 감수성이 높았으며 사람의 혈구에서는 B형 혈액형에서 다소 높은 감수성을 나타내었다.