Abstract
Protoplasts were isolated from cotyledons, hypocotyls, and mesophyll tissues of three species of Capsicum species (C. anuumm, C. bacatuum, and C. chacoense). Combination of Cellulysin (1%) and Macero-zyme (0.25%) in 0.65 M sorbitol was found to be the most effective for the digestion of cell wall, regardless of the Capsicum species. Antioxidant MES (2-［N-Morpholino］ethanesulfonic acid) in the enzyme solution helped protoplasts overcome browning. After 5 days of initial culture, Cell division occurred in modified K8p medium containing 1~5 mg/L zeatin, 0.5 mg/L IAA, 0.1~0.5 mg/L TDZ, and 1 mg/L 2,4-D under continuous dark condition at $25^{\circ}C$. Semi-solid agarose culture method was more effective than liquid culture, and it also protected the cells from browning caused by polyphenolic compound released during protoplast culture. A total of 4000 calli were obtained from protoplast culture of different capsicum species. All of these calli were transferred to the 100 combinations of regeneration media using various plant growth regulators; TDZ, IAA, 2ip, BAP, NAA, and zeatin. These calli derived from protoplast of three species of capsicum were, however, not differentiated into shoots.
고추 C. anuumm, C. bacatuum, C chacoense의 하배축, 자엽 및 본엽을 원형질체 분리재료로 하여 실험한 결과, 원형질체 분리를 위해서 세포벽 분해효소로 1% Cellulysin과 0.25% Macerozyme 효소의 조합과 삼투조절제로 0.65 M sorbitol을 사용하였다. 항산화제인 MES를 효소용액에 첨가하여 줌으로써 원형질체 분리과정에서 발생하는 갈변을 억제시킬 수 있었다. 원형질체를 수정된 K8p 배지에 1∼5 mg/L zeatin, 0.5 mg/L IAA, 0.1∼0.5 mg/L TDZ, 1 mg/L 2,4-D를 첨가하여 배양하였을 때 5일에 분열을 시작하였으며 원형질체에서 얻어진 colony들을 agarose가 첨가된 반고체 배지에 고정하여 배양하는 방법이 액체평판배양 방법보다 더 효과적이었으며 이 방법은 세포배양시 분비되는 페놀류 물질로 인한 갈변을 방지할 수 있었다. 세 가지 다른 고추속의 원형질체 배양에서 얻어진 4000여 개의 캘러스를 식물생장조절제인 TDZ, IAA, 2ip, BAP, NAA, zeatin을 이용한 100가지 다양한 조합의 재분화 배지에 옮겼으나 캘러스가 커지거나 고사하는 현상만 관찰되었을 뿐 줄기로 재분화된 식물체는 얻을 수 없었다.
