Tuberculosis and Respiratory Diseases
- Volume 49 Issue 2
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- Pages.189-197
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- 2000
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- 1738-3536(pISSN)
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- 2005-6184(eISSN)
TIMP-2 Gene Transfer Via Adenovirus Inhibits the Invasion of Lung Cancer Cell
TIMP-2 유전자 재조합 아데노바이러스의 폐암세포 침윤 억제 효과
- Oh, Yeon-Mok (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University) ;
- Lee, Jae-Ho (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University) ;
- Yoo, Chul-Gyu (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University) ;
- Chung, Hee-Soon (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University) ;
- Kim, Young-Whan (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University) ;
- Han, Sung-Koo (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University) ;
- Shim, Young-Soo (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University) ;
- Lee, Choon-Taek (Department of Internal Medicine, Seoul National University, College of Medicine, and Lung Institute, Medical Research Center, Seoul National University)
- 오연목 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소) ;
- 이재호 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소) ;
- 유철규 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소) ;
- 정회순 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소) ;
- 김영환 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소) ;
- 한성구 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소) ;
- 심영수 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소) ;
- 이춘택 (서울대학교 의과대학 내과학교실 및 의학연구원 폐연구소)
- Published : 2000.08.30
Abstract
Background : Tissue inhibitor of metalloproteinase is a natural inhibitor that counteracts pro teolytic enzymes essential to the invasion of cancer cell. Whether or not TIMP-2 gene transfer via adenovirus could inhibit the invasion of lung cancer cell iη vitro was evaluated for the future purpose of gene therapy against lung cancer. Methods : Recombinant adenovirus-TIMP-2(Ad-TIMP-2) was generated by homologous recombination after pACCMV-TIMP-2 and pJM17 were cotransfected into 293 cell by standard calcium phosphate coprecipitate method. Calu-6, one of the most invasive lung cancer cells, was transduced with Ad-TIMP-2 or Ad-
연구배경 : 폐암은 진단 당시 이미 국소 침윤이나 원격 전이가 된 경우가 많고 이에 대한 적절한 치료법이 없기 때문에 예후가 불량하다. TIMP(tissue inhibitor of metalloproteinase)는 암세포의 침윤 및 전이에 중요한 역할을 하는 metalloproteinase를 억제하는 물질로서 생체 내에 존재하는 전이 억제 물질이다. 본 연구는 아데노바이러스를 이용한 TIMP 유전자 치료법을 개발하여 폐암의 치료에 응용하고자 하였다. 방법 : 폐암세포는 침윤 및 전이 능력이 큰 Calu-6를 사용하였다. TIMP-2 유전자를 pACCMVpLpA에 subcloning 한 후 pJM17과 함께 293 cell에 cotransfection 한 후 homologous recombination을 이용하여 Ad-TIMP-2를 제작하였다. Ad-TIMP-2를 Calu-6 cell에 이입하여 TIMP-2 protein 이 생산되는지를 TIMP-2 ELISA를 이용하여 확인하였고 TIMP-2의 생물학적 활성은 zymography로 확인하였다. Soft agar clonogenic assay로 종양형성능을 평가하였다. Ad-TIMP-2로 처리한 calu-6를 6주간 soft agar에서 키운 후 육안으로 보이는 colony 수를 측정하였다. Matrigel을 이용하여 invasion assay를 시행하여 calu-6의 침윤 능력의 변화를 평가하였다. 결과 : TIMP-2 ELISA 결과, 모세포 calu-6와 Ad-