One-Step RT-PCR 방법에 의한 수입 호접란묘의 심비디움 모자이크 바이러스와 오돈토글로섬 윤문 바이러스의 검정

Detection of Cymbidium Mosaic Virus and Odontoglossum Ringspot Virus in Seed-Derived Plantlets of Phalaenopsis Imported by One-Step RT-PCR

우리나라 난 재배 농가에서 많이 재배하고 있는 호접란 대만 수입묘의 바이러스 감염 정도를 검정하기 위하여 플라스크묘 상태의 실생 번식 식물체를 공시하여 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR) 기술에 의해 CymMV와 ORSV의 감염 여부를 검정하였다. 호접란 식물체의 잎에서 조즙액을 추출하여 RT-PCR을 위한 total RNA로 사용하였다. $42^{\circ}C$에서 45분간 반응시켜 cDNA를 합성하였으며, $96^{\circ}C$에서 2분간 template를 예비 변성시킨 후, $96^{\circ}C$에서 30초간 template 변성, $60^{\circ}C$에서 30초간 primer 부착 및 $72^{\circ}C$에서 1분간 DNA 합성을 1cycle로 하여 총 36cycle을 반응시키고, $72^{\circ}C$에서 10분간 안정화하는 조건으로 one-step RT-PCR을 수행하였다. 바이러스 검정 결과 정도의 차이는 있으나, 40개 시료 모두 CymMV에 감염되어 있었으며, ORSV에 감염된 식물체는 없었다.

This experiment was carried out to detect the cymbidium mosaic virus (CymMV) and the odontoglossum ringspot virus (ORSV) in the seed-derived plantlets of Phalaenopsis imported from Taiwan by one-step reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Simple and rapid crude plant extracts for RT-PCR were prepared. The reverse transcription step was performed at $42^{\circ}C$ for 45 min and the following thermal cycling scheme was used for 36 reaction cycles: template predenaturation at $96^{\circ}C$ for 2 min, template denaturation at $96^{\circ}C$ for 30 s, primer annealing at $60^{\circ}C$ for 30 s, and DNA synthesis at $72^{\circ}C$ for 1 min. Of the 40 seed-derived plantlets of Phalaenopsis imported from Taiwan, all of them were infected with CymMV, but ORSV was not detected.