TT2 Embryonic Stem Cell 을 이용한 Chimeric Mouse 생산에 있어서 간단한 공배양방법

Simple Methods for Production of Chimeric Mouse by Coculture with TT2 Embryonic Stem Cells

본 연구는 TT2 embryonic stem(ES) cell을 이용하여 chimeric mouse를 생산하는데 있어서 더욱 간편한 공배양방법 개발하기 위하여 수행되었다. 유전자 적중 생쥐의 개발은 유전자의 기능을 연구하는데 매우 중요한 수단으로 이용되고 있다. 이러한 생쥐의 개발에 있어서 chimeric mouse를 생산하는 과정은 ES cell의 종류의 차이는 있지만 주로 배반포기의 수정란에 ES cell을 주입하고 있다. 이 기술은 고가의 미세조작장치 뿐만 아니라 고도의 기술을 요하고 있다. 그러므로 본 연구에서는 TT2 ES cell를 8세포기 수정란과 공배양할 때의 필요로 하는 적절한 ES cell의 수를 검증함으로써 chimeric mouse의 생산 효율을 높일 수 있었다. 각각 0.5$\times$$10^{6}$, 1$\times$$10^{6}$과 2$\times$$10^{6}$$m\ell$의 ES cell을 8 세포기의 수정란과 공배양하였을때 0.5$\times$$10^{6}$과 1$\times$$10^{6}$$m\ell$에서 높은 배반포기로의 발달율을 나타내었다. 또한 가임신된 생쥐에 이들 배반포기를 이식한 결과 1$\times$$10^{6}$$m\ell$에서 높은 chimeric mouse 생산 효율을 나타내었다. 이러한 결과는 적절한 수의 ES cell과 수정란을 공배양함으로써 매우 간단하게 효율 좋은 chimeric mouse을 얻을 수 있음을 제시하고 있다.

Gene targeting are very useful tools for the research on the gene function in vivo, mass production of foreign materials and biomedical approach of therapeutic process. But this process is very complicated and necessary highly skilled technique, because it is very different from ES cell origin, genetic background of embryo, and experimental conditions. We investigated the productivity ability of chimeric mouse after aggregation with TT2 ES cells. Increse of ES cell density caused gradual decrease in embryo development in vitro and in th $\varepsilon$ production of chimeric mice in vivo. One million ES cell density for the aggregation was very efficient to produce high percentage chimeric mice in their coat color. These results suggested that appropriate cell density plays a key role in the development and production of chimeric mice by a 8-cell aggregation method.