Callus Formation from Alfalfa (Medicago sativa L.) Seed and Plant Regeneration from Alfalfa Calli

알팔파 종자로부터 캘러스 유도 및 식물체 재분화

The conditions for callus formation and plant regeneration were confirmed in four varieties of alfalfa(Medicago sativa L.). Among four varieties of alfalfa, "Vernal" expressed the highest rate for both of callus formation and plant regeneration. Otherwise, among SH(Schenk and Hildebrandt), MS(Murachige and Skoog) and N6 medium (Chu), SH medium was highest degree of efficiencies respectively in callus formatio and plant regeneration. In this study, we determined volume of hormones and other compounds appended in media. For callus formation, only $3mg/{\ell}$ of 2,4-D (2,4-dichlorophenoxy acetic acid) was appended in their media. For plant regeneration, the three kinds of media were used; the medium appended $5mg/{\ell}$ of NAA (1-naphtalene acetic acid) and $2mg/{\ell}$ of kinetin (6-furfurylaminopurine), the medium appended $11mg/{\ell}$ of 2,4-D and $1mg/{\ell}$ of kinetin, and the medium appended $1.6g/{\ell}$ of ammonium sulfate and $5.75g/{\ell}$ of proline. We obtained alfalfa plants from callus by regeneration, about sixty five days later transfer calli to regeneration media.

4품종의 알팔파(Medicago sativa L.) 종자로부터 직접 캘러스를 유도하고, 형성된 캘러스로부터 식물체를 재분화하는 조건을 확립하였다. 공시품종중 "Vernal" 품종이 캘러스 유도 및 재분화에서 가장 우수한 것으로 판명되었으며, SH(Schenk and Hildebrandt), MS(Murashige and Skoog), N6(Chu) 배지중에서 SH 배지가 캘러스 유도와 재분화시에 모두 유리한 것으로 나타났다. 캘러스 유도 및 증식시에는 2,4-D $3mg/{\ell}$을 첨가한 조건이 가장 효율이 좋았으며, 식물체 재분화 조건은 $5mg/{\ell}$의 NAA (1-naphtalene acetic acid)와 $2mg/{\ell}$의 kinetin (6-furfurylaminopurine)을 첨가한 배지에서 28~30일간 배양하고, $11mg/{\ell}$의 2,4-D와 $1mg/{\ell}$의 kinetin을 첨가한 배지에서 3~5일 배양한 다음, $1.6g/{\ell}$의 ammonium sulfate와 $5.75g/{\ell}$의 proline을 첨가한 배지에서 21~25일 배양하며 재분화를 완성한 조건 3이 가장 효율이 좋았으며, 캘러스로부터 완전한 식물체로 재분화되는데 필요한 시간은 약 52~60일이었다.