Isolation of an Acid-Labile Gene from the Seaweed Porphyra yezoensis Tissue

해조류 김 Porphyra yezoensis 엽체로부터 산에 민감한 유전자의 분리

The genetic responses of aquaculturable seaweed Prophyra yezoensis tissue by acid shock have been compared using differential display technique. The tissue has been challenged in seawater containing 0.05% hydrogen chloride(pH 3.0) for 5 min, then rehabilitated in normal seawater for 10 min, 30 min, 60 min and 4 hrs, respectively. Total RNA was extracted by LiCl-guanidinium method. The cDNA was synthesized by reverse transcription with random hexamers and amplified by PCR with arbitrary primers. The genetic fragment disappeared by acid shock was selectively isolated from agarose gel and sequenced with a DNA auto sequencer. One of the acid-labile gene(605 bp) was identified as a dethiobiotin synthetase gene according to sequence alignment analysis by the NCBI BLAST search program.

대표적인 양식 해조류인 방사무늬 김 엽체를 대상으로 하여 산 처리에 의한 유전형질의 표현 변화를 differential display기법으로 비교하여 보았다. 방사무늬 김 엽체를 0.05% HCl을 첨가한 해수(pH 3.0)에서 5분간 처리한 후 각각 10분, 30분, 60분 그리고 4시간동안 멸균 해수에서 정치 배양시키면서, RNA를 추출하여 cDNA합성, PCR 증폭, agarose gel 전기영동 및 DNA 염기배열을 조사하였다. 그 결과 arbitrary primer OPA 1(CAGGCCCTTC)을 사용하여 differential display한 경우, 산 처리 후 30분간 멸균 해수에서 정치 배양한 엽체에서 특이적으로 RNA 합성이 일어나지 않은 유전자를 분리할 수 있었으며, 그 염기서열을 비교한바 이 유전자 fragment(605 bp)는 dethiobiotin synthetase 유전자와 93%의 높은 상동성을 가진 것으로 나타났다.