Abstract
Nematodes were isolated using silkwom trap through the investigation of 100 soil samples from various biotopes in Korea. The 30 nematode strains from soil and dead insects by the pathogenicity aganinst silkworms (Bombyx mori mori) and insect pests of Calliphora vomitoria, Pseufazetia separata, Palomena angulosa, and Melolontha incana. Mortailty of the silkworm larvae and pupae were as high as 100% by nematode infection, those of insect of pests were varied from 20 to 100%. The 30 strains of entemopathogenic nematodes were classified into five groups of Rhabditidae, Diplogatroidae, Heterorhabitidae, Steinernematidae, and Tylenchida by morphological criteria. The genetic relationships among the 30 nematode strains were analyzed by various RAPD bands with twenty primers. The 30 nematode strains were classified into six major subgroups on the basis of the genetic similarity coefficient of 0.853. The grouping by RAPD was agree with those of morphological taxa in discrimination of the higher group, however, was not completely agree in the subgroup. The family Steinernematidae belong to Rhabditida was clarified as closer to the Tylenchida, rather than the other Rhabditida of Heterorhabitidae, Rhabditidae, and Diplogatroidae in genetic distance valule. From the result of the morphological classification and RAPD of the genomic DNA showed that genetic relationship analysis furnish infurmation on phylogenetic classification and relationships of entomopathogenic nematodes. The application of genetic similarity will overcome the limitation of taxonomy and classification of morphologically simple nematode. Several primers were confirmed those utility of identification for individual nematode strains, the methods of molecular genetics secured the simplicity, rapidity and accuracy on the selection of entomopathogenic nematodes.
우리나라의 다양한 지역에서 100개의 토양과 곤충사체에서 누에 trap을 이용하여 곤충병원성 선충을 분리하였으며, 위생해충인 털검정파리유충(Calliphora vomitoria)과 농업해충인 멸강나방유충(Pseufaletia separata), 북방풀노린재 (Palomena angulosa) 그리고 왕풍뎅이유충(Melolontha incana) 에 대하여 20∼80%의 살충력을 나타내며, 누에(Bombyx mori mori)유충과 번데기에 대한 살충력은 100%인 선충 30계통을 선발하였다. 선발한 선충 30계통은 형태적 특징에 따라 Rhabditidae, Heteror-habditidae, Diplogasteridae, Steinernematidae, Tylenchidae의 5개 분류군으로 나뉘어졌다. 선충의 동정법 개선 및 분자생물학적 분류기준의 검토를 위하여 random primer 130개 중에서 20개의 primer를 선발하고, genomic DNA의 RAPD-RCR을 수행한 결과 유사도 0.853에서 형태적 분류기준과 일치하였다. 유사도계수를 이용한 5개 분류군에 속하는 선충 계통간의 유전적 근연관계는 Rhabditida에서 Steiner-nematidae는 경우 동일 목의 Heterorhabditidae및 Rhabditidae와는 유사도 0.819로서 거리가 멀고, 다른 목인 Tylenchidae와는 0.827로서 보다 더 근연이었다. 또한 Rhabditidae분류군은 유사도 0.863에서 다시 2개의 분류군으로 나누어졌으나 형태적 차이는 명확하지 않았다. 형태적 분류를 참조한 genomic DNA의 RAPD결과 유사도의 적절한 응용은 생물적 방제를 위한 곤충병원성 선충의 선발 및 동정에 있어서 형태적 단순성에 기인하는 자연분류의 한계를 보완 또는 극복할 수 있는 분자생물학적 동정법으로서 유용할 것이다. 또한 RAPD에 의한 동정은 생태환경에서 다수의 개체를 확보하기 쉬운 dauer larvae 또는 infective juvenile 등 유충기의 선충을 이용할 수 있다. 그러므로 노력이 소요되는 성충의 채집과 표본제작 등이 생략되므로 선충의 동정에 매우 안정적이며 효율적인 방법으로 판단되었다.
