Abstract
We carried out immunoblot analyses to study expression and subcellular distribution of the N-methyl-D-aspartate receptor(NR) subunits in salmon (Chum Salmon, Oncorhynchus keta). We prepared subcellular fractions such as brain homogenates, synaptosomes, and postsynaptic density (PSD) from salmon brains, and analyzed protein compositions by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In a Coomassie-stained 6% SDS-gel, about 20 distinct major protein bands could be identified in the PSD fraction. Immunoblot analyses using antibodies against rat NR subunit 2A and 2B antigens (NR2A and NR2B, respectively) showed weak but evident signals at the 180 kDa positions in the salmon PSD fractions. However, in contrast to rat NRs, the salmon NR2A and NR2B are not recognized by a phosphotyrosine-specific antibody suggesting that the salmon NRs are regulated differently from those of the rat by protein tyrosine kinases. Our results indicate that NR2A and NR2B subunits are expressed in the salmon PSD fraction but not regulated by tyrosine phosphorylation.
본 연구는 연어 뇌 연접의 단백질구성에 대한 기초연구로서, 기억형성에 중요한 역활을 하는 NMDA 수용체의 분포와 PTK에 의한 인산화에 대하여 조사하였다. 본 실험에 사용한 연어 뇌의 PSD 분획에서는 Coomassie로 염색할 경우 20여개 분명한 단백질띠를 확인할 수 있었으며, 소량으로 존재하여 전체적으로 도말되어 보이는 펩타이드의 수는 알 수 없었다. 이들 중 180kD 크기의 단백질은 phosphotyrosine 특이성 항체에 상대적으로 잘 인식이 되었다. 또한 이 180 kDa의 단백질들은 쥐에 있어서의 NR2A 및 NR2B의 위치인 분자량 약 180kD의 위치와 동일한 것으로 보아 연어에 있어서도 후각기능에 관계하는 NR2A 및 NR2B가 존재함을 추정할 수 있다.
