Sensitive Fluorogenic Derivatization Method for Bile Acids by Dansyl Cadaverine

Dansyl Cadaverine을 이용한 담즙산류의 고감도 형광측정법

Free and glycine conjugated bile acids were detected fluoromatrically in high-performance liquid chromatography after derivatization with dansyl cadaverine. The coupling agent, diethyl phosphorocyanidate was used to form the amide bond between dansyl cadaverine and analytes. The dansyl derivatives of 8 bile acids were separated successfully on Cosmosil ODS column by using linear gradient elution of 20% MeOH-water/$CH_3CN$. The detection limits of cholic acid was reached 10 pg(S/N=5) per $1{\mu}l$ of injected volume. This new derivatization method would be applicable to detect the changes of bile acids in biological samples.

유리 담즙산 및 담즙산의 글리신복합체를 dansyl cadaverine을 형광유도체화제로 사용하여 역상HPLC에서 분리하고 형광으로 검출할 수 있는 방법을 개발하였다. 8종류의 유리 및 복합체 담즙산을 dimethylformamide를 반응용매로 하여, amide결합 형성반응용 축합제로서 diethyl phosphorocyanidate를 사용하여 형광유도체화제인 dansyl cadaverine과 반응시켰다. 반응액중 일부를 20% methanol-water/acetonitrile을 기본 용리액으로한 직선 농도구배 조건의 HPLC에 의하여, 8가지 담즙산류를 완전히 분리할 수 있었다. 역상컬럼으로부터 용출된 담즙산의 형광유도체는 여기파장(${\lambda}ex.$) 340 nm, 형광파장 (${\lambda}em.$) 520 nm에서 측정하여 콜린산의 경우 약 10 pg(S/N 비=5)까지 측정할 수 있었다.