Abstract
For simple and rapid detection of Pseudomonas tolaasii (PT), a bacterial brown blotch pathogen of oyster mushroom, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) were developed. To produce specific antibody, PT ($5{\times}10^7$ cfu) and Freund's adjuvant were subcutaneously immunized into rabbits several times. By using the antiserum showing the highest titer, we established noncompetitive and competitive ELISA's. Standard curves of the ELISA's showed that the detection limits were $2{\times}10^2$cfu/ml and $3{\times}10^2$cfu/ml, respectively When investigated by noncompetitive ELISA, cross reactivities of the anti-PT antibodies against P. agarici, P. reactans, and other fluorescent Pseudomonas spp. were very low (<1/10$^3$), but those against P. solanacearum, Erwinia chrysanthemi, Streptococcus mutans, Xanthomonas citri, and a fungus Fusarium oxysporum were almost none. However, when investigated by competitive ELISA, the reactivities against any other strains except PT were almost none. When the ELISA's were applied to 18 strains derived from mushrooms in order to identify PT, only 11 strains showing both pathogenicity and white line reactivity were obviously positive. These results showed that the ELISA's could be convenient tools to detect PT in accordance with existing methods.
느타리버섯의 세균성갈반병균인 P. tolaasii(PT)를 신속 간편하게 검출할 수 있는 효소면역측정법 (ELISA)을 개발하였다. 특이항체를 생산하기 위하여 PT($5{\times}10^7$ cfu)를 Freund's adjuvant와 함께 토끼에 수차례 면역하였으며, 가장 높은 역가를 나타낸 항혈청을 이용하여 비경합 ELISA 및 경합 ELISA를 각각 확립하였다. 표준곡선으로부터 PT의 그 검출한계는 각각 $2{\times}10^2$cfu/ml 및 $3{\times}10^2$cfu/ml가량으로 나타났다. 교차반응은 비경합 ELISA의 경우 P. agarici, P. reactans 및 비병원성 Pseudomonas속 균주와 1/$10^3$이하의 매우 미약한 반응을 보였으나 P. solanacearum, Erwinia chrysanthemi, Streptococcus mutans, Xanthomonas citri 및 곰팡이인 Fusarium oxysporum등 다른 균주와의 반응성이 거의 없었으며, 경합 ELISA의 경우 PT이외에는 같은 속 균주에 대하여도 반응성이 거의 없었다. ELISA를 이용하여 버섯으로부터 분리된 18균주에 대하여 PT의 여부를 조사하였을 때 병원성과 white line 반응성을 동시에 나타내었던 11균주에 대하여만 명확한 양성으로 나타나, 본 연구에서 확립한 ELISA는 간편하고 정확한 PT검출법 임이 확인되었다.
