Abstract
An attenuated Japanese encephalitis virus (JEV) clone SA-14-14-2(Vero) was obtained through successive adaptation of a primary cell adapted strain, SA-14-14-2(PDK) to Vero cell, a continuous line of monkey kidney cells. The virus titer reached above the 107 plaque forming unit (pfu) per mL of culture supernatant with 3 passages in Vero cells and was maintained close to this level in the further passages. The optimum temperature for the virus growth was $35^{\circ}C$. Growth pattern of the virus indicated that optimum time for the virus harvest is 4 days post infection and the virus accomplished rapid initial propagation even in medium containing no serum supplement. The roller bottle (RB) system and the spinner flask (SF) system using micro-carrier (Cytodex-1) for the JEV cultivation were explored. When RB, SF, and T-flask culture system were compared, there was no significant difference in virus yield. Furthermore, the results indicated that virus could be harvested multiple times from 3 days to 9 days post infection; neither severe cytopathic effect (CPE) in the infected cells nor the decrease in the titer was observed on duration of 9 days.
세계보건기구 (WHO)가 백신 생산에 권장하고 있는 표준세포 주인 Vero 세포에 약독화 일본뇌염바이러스인 SA14-14-2 ( (PDK)를 연속 계대배양을 통해 적응(adaptation)시켜, tIter가 $10^7$pfu/mL을 넘는 SA-14-14-2(Vero)을 분리하였다 바이러스 배양 최적온도는 $35^{\circ}C$이며, T -flask에서 배양된 바이러스의 최고 tIter는 감염 후 4일째에 $4\times10^7$ pfu/mL로 관찰되었다. 또한 무혈청배지에서도 바이러스 증식이 활발하여 2% 혈청이 보충된 정우와 거의 비슷한 바이라스 tIter를 보였다. 바이러스 대량 배양을 위해 roller bottle culture와 미 립 담체 플 이용한 spinner flask culture 가능성에 대하여 고찰하였다 바이러스 감염을 위한 미립담체에서의 Vera cell monolayer는 초기 세포 농도 $4\times10$ cells/mL로 접종하여 50 rpm에서 7일간 배양하여 얻을 수 있었다. 바이러스의 roller bottle 배양이 spinner flask 배양보다 바이러스 tIter변에서 2배 내지 3배 높 았고, $10^7$pfu/mL을 넘는 배양 기간도 하루 죄었다. 하지만 두 배양 방법 모두 T -flask 배양에서와 같이 무혈청 배지를 사용 하여도 바이라스 증식이 활발했고, 최고조의 tIter를 보이는 배 양기간은 감염 후 2일째로써 T -flask 배양에서 보다 2일 빨랐다. Roller bottle culture의 경우, 감염 후 3일부터 17일까지 2 일 간격으로 배양액을 무혈청 EMEM으로 100% 교체하면서 매 양을 지속한 결과 3일부터 9일까지 $10^7$pfu/mL을 념는 tIter가 유지되는 것이 확인되어 바이러스의 multi-harvest가 가능한 것 로 고찰되었다. 상기의 결과는 생산성 면에서 매우 유리한 결 과로 제품의 생산 단가플 낮추고 작업 노력을 절감하는 기대 효 과가 클 것으로 예측된다.