초록
미생물 효소에 의해 생산된 생산모액 내의 글루타치온(L-${\gamma}$-glutamyl-L-cysteinylglycine, GSH)을 액체크로마토그래피를 이용하여 분리하였다. GSH와 결합하는 수지를 선택하기 위해 여러 수지와 GSH 수용액을 사용하여 회분식 흡착실험을 한 결과, pH 8.0에서 음이온 교환수지인 Q-sepharose와 QAE- sephadex에 GSH가 결합하였으나, QAE-sephadex는 수지와 결합된 GSH를 이탈시키기 위해 사용된 salt에 의해 부피가 줄어들어 부적합하였다. GSH 분리를 위한 기초실험을 위하여 GSH, cysteine, glutamate, glycine, $\gamma$-glutamylcysteine, ATP, glucose의 혼합액에서 GSH와 $\gamma$-glutamylcysteine를 다른 물질로부터 1차 분리할 수 있었다. NaCl의 농도를 조절하여 두 물질이 중첩되는 현상을 제거하여 분리하고자 하였으며, GSH의 tailing현상을 줄이도록 노력하였다. NaCl(35mM)을 용해시킨 Tris buffer를 사용함으로써 두 물질의 분리가 가능하였고, 생산모액을 사용하여 실험한 결과, 혼합 시료와 유사한 분리결과를 얻을 수 있었다. Standard solution에서의 GSH 분리결과 72.6%의 회수율을 보였으며, 생산 모액에서는 84.4%의 회수율을 각각 보였다.
Glutathione(L-$\gamma$ -glutamyl-L-cysteinylglycine, GSH) produced by microbial enzymes was separated by a liquid chromatography. In order to select a resin which would bind GSH efficiently, a batch adsorption experiment was carried out with GSH solution and various resins at pH 8.0 GSH bound to Q-sepharose and QAE-sephadex among anion exchange resins, but the latter was found not to be suitable because of the reduction of resin volume at high salt concentration. Preliminary experiments using a standard solution were carried out to separate GSH. GSH and $\gamma$ -glutamylcysteine were separated from the other constituents by applying step gradient of salt(NaCl) concentration. GSH was successfully separated from $\gamma$ -glutamylcysteine by applying Tris buffer containing 35mM NaCl. Chromatographic separation behaviors for the enzymatic product was similar to that for the standard solution. Separation yields of GSH from the standard solution and enzymatic product solution were 72.6% and 84.4%, respectively.
