Partially purified Toxoplasma gondii antigens by immunoaffinity chromatography

Immunoaffinity chromatography를 이용한 톡소포자충 항원의 부분정제

Tachyzoite antigens of Toxoplosnc gondii (RH) were partially purified by immunoaffinity chromatography. The cultivated ToxopLusmc in uiuo (mouse) and in nitro (Hep-2 cell) and peritoneal fluid of T. Bondii infected mice were collected for antigen analy- sis. Tachyzoite antigens collected from infected mouse showed positive bands of 76 kDa, 70 kDa,64 kDa, 53 kDa, 46 kDa, 44 kDa, 41 kDa, 35 kDa, 25 kDa, 18 kDa, and 13 kDa on immunoblot with anti-Toxoplcsmn rabbit sera, and those from infected Hep-2 cells revealed reactive bands of 70 kDa,64 kDa,53 kDa,35 kDa,28 kDa, and 13-10 kDa. After applying to an IgG-Sepharose column, two elusion peaks, E-1 and I-2 fractions, were obtained from both soluble antigen of T. gondii and the peritoneal fluid of infected mice, respectively. Immunoblots of soluble antigen with immunized rabbit sera revealed positive bands of 97 kDa, 63 kDa, 53 kDa and 35 kDa from I-1 fraction and 53 kDa and 35 kDa from I-2. In the case of the eluted peaks from mice peritoneal fluid, E-1 showed protein bands of 84 kDa,76 kDa,53 kDa and 29 kDa bands and 53 kDa and 45 kDa from I-2 on immunoblots. Serum IgG antibody titer of mice immunized with T gonnii tachyzoites was increased on 1 week after booster immunization when analysed by ELISA using crude antigen, while it was elevated on 3 weeks after booster immunization by ELISA using puri- fied antigen.

톡소포자충. RH주 tachyzoite의 항원성 난백질에 대하여 알아보고자 마우스 복강 내 또는 in uipo에서 Hep-2 cell에 계대한 톡소포자충과 감염마우스의 복팡앤으로 SDS-PAGE/immunoblot을 시행하였다 또 lmnoanity chromatoaphy를 이용하여 톡소포자충 항원을 징제한 후 SDS PAGE/immunoblot을 시행하여 항원을 분리하였으며. 톡소포자충 조항원 및 정제항원으로 면역시킨 마우스 혈청을 이용하여 IgG-ELISA를 시행하였다. 톡소포자충 용해물을 면역시킨 노끼의 항혈 청으로 immunoblot을 시행하였을 때 마우스 복강 내로 계대한 톡소포자충에서 76 kDa. 70 kDa. 64 kDa. 53 kDa 46 kDa. 44 kDa. 35 kDa. 25 kDa. 18 kDa 및 13 kDa의 항원대가 관찰되었으며. in vitro에서 Hep-2 cell에 배양한 톡소포자충은 70 kDa. 64 kDa. 53 kDa 35 kDa. 25 kDa 및 13-10 kDa의 항원대가 관찰되어 마우스 복강 내에 계대한 톡소포자충에서 더 많은 항원대가 관찰되었다. 마우스 복강 계대한 tachyzoite 용해물을 immunoaffinity글 시행하여 부분 정제한 후 떤역시킨 초기의 항혈청으로 immunoblot을 하였을때 E-1에서는 97 kDa. 63 kDa. 53 kDa 및 35 kDa이 E-2에서는 53 kDa 및 35 kDa이 나타났다. 한편 감염 마우스 복강 액에서는 76 KDa 53 KDa. 35 kDa 및 29-28 kDa의 항원대가 관찰되었으며. 정상 마우스 복강 액에서도 약하게 76 kDa .35 kDa 및 29-28 kDa의 반응대가 관찰되었다. 감염 마우스 복강앤을 IgG-Sepharose column을 통과시킨 후 시행한 immunoblot에서 E-1은 84 kDa. 76 kDa. 5,B kDa 및 29 kDa이 . E-2에서 53 kDa 및 45 kDa의 항원대가 관찰되었다. 이 실험에서 immunoawnity chromatography를 이용하여 톡소포자충 용해물 및 분비물에서 76 kDa. 63 kDa. 53 kDa. 35 kDa 및 29 kDa의 항원을 불리하였다. 톡소포자충의 조항원과 정제항원 (감염 마우스 복강액. E-1)으로 IgG-ELISA를 시행한 결과. 조항원의 경우 2차 면역 후 1주 후부터 IgG 항체가 증가하였고 정제 항윈은 2차 면역 후 3주 후부터 IgG항체가 증가하였다 (p<0.05).