Rapid detection of Theileria sergenti by polymerase chain reaction

중합효소연쇄반응을 이용한 Theileria sergenti의 신속한 검출

Four separate pairs of oligonucleotide primers within the coding region in a T sergenti 33-kDa surface protein gene were selected to detect T. sergenti by PCR. The specificity of PCR-amplified DNA was examined by digestion with restriction enzyme 3nd Southern blot hybridization using T. sergenti p33 DNA probe. PCR appears to be specific for T. sergenti, without detectable signals from uninfected erythrocytes, uninfected bovine leukocytes and other hemoparasites, including A. morginnle and 3. ouata. Although 46 of 71 specimens (64.8%) from grazing cattle were microscopically positive. PCR in this study showed that 64 specimens (88.7%) were positive. Therefore, PCR proves a useful diagnostic tool for detecting T sergenti-infected cattle. In addition, it is also revealed that PCR was significantly more sensitive than traditional microscopic examination using Giemsa's stain.

Theileria sergeni의 진단방법으로 Giemsa 염색에 의한 광학현미경적 관찰이 가장 통상 적으로 이용되고 있으나 감염이 아주 적거나 내과성인 경우 검출하기가 매우 곤란하다. 이에 PCR 진단을 위한 대강유전자로서 p33의 염기서열을 이용하여 4개의 oligonucleotide primers. TS1, TS2 ,TS3,, TS4를 작성하였다. 작성된 primer의 각 조합에 따라 PCR한 결과 TS1과 TS4 조합에서는 499 bps, TS1과 TS3 조합에서는 381 bps, TS2와 TS4 조합에서는 365 bps, TS2 와 TS3 조합에서는 247 bps 크기의 산물을 획득하였다 이 PCR산물은 p33 유전자 염기서열 분석을 통한 제한효소처리 및 Southern blot hybridization 방법을 통하여 그 특이성을 확인하였다. Primer의 특이성을 조사한 결과 미감염 백혈구 및 다른 주혈기생충인 Babesic ouota, Anaplosmn marginate에 대해서는 교차 반응을 나타내지 않았다. 또한 야외시료에 PCR 기법을 적용한 결과 Giemsa 염색에 의한 광학현미경적 관찰에서는 64.8%의 양성률을 보인 반면, PCR 진단에서는 본 실험에서 작성된 TS1과 TS4, TS2와 TS3 조합이 공희 88.7%의 양성률을 나타내었다.