KSBB Journal
- 제11권4호
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- Pages.431-437
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- 1996
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- 1225-7117(pISSN)
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- 2288-8268(eISSN)
특정부위돌연변이화에 의해 변형된 nar 프로모터를 발현 프로모터로 이용하기 위한 특성연구
Characterization of the Nar Promoter Modified by Site-directed Mutagenesis to Use as an Expression Promoter
초록
본 연구에서는 질산염(nitrate) 존재하에서 혐기 조건이 되면 최대로 발현되는 변형된 naT 프로모터 를 대장균내에서 단백질을 대량 생산하기 위한 발현 운반체로 쓰일 수 있는지를 조사하였다. 이를 위해 용존산소농도에 따라 naT 프로모터의 유도에 영향을 미치는 염색체 fnT 유전자가 발현되지 못하는 대장 균(ES200l)에 pBR322 플라스미드에 프로모터상 의 10 지역에서 특정부위돌연변이화에 의해 cons sensus sequence로 바핀 변형된(modified) naT 프 로모터(pMW616)가 도입되어 있는 계(pMW616/ E ES2001 )가 이용되었다. 이 변형된 naT 프로모터의 하류에는 구조유전자(structural gene) 인 질산염 환 원효소대 신에
The nar promoter of Escherichta coli, which is maximally induced under anaerobic conditions in the presence of nitrate, was characterized to see whether the nar promoter cloned onto pBR322 can be used as an expression promoter. The modified nar promoter, in which several bases in the -10 region was mutated to the consensus sequence by site-directed mutagenesis, was characterized in E. coli, on which chromosome the fnr gene affecting expression of the nar promoter according to dissolved oxygen level was mutated. The E. coli lacZ gene was used as a reporter gene. The following effects were investigated to find optimal conditions to induce the modified nar promoter: induction methods, optimal nitrate concentrations, the amount of
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