Abstract
Intrinsic binding kinetics of of 125I-bovine serum albumin (125I-BSA) and immobilized monoclonal anti-BSA (MAb 9.1) were studied. Small non-porous polystyrene beads (0.5${\mu}$m diameter) were used as a solid support to minimize the mass transfer interference on rate measurements. We demonstrated both theoretically and experimentally that the binding reaction is kinetically controlled. Rate measurements show that the association reaction is of second order and the dissociation reaction is of first order. Between 4 and $37^{\circ}C$ the measured equilibrium constant agrees well with the equilibrium constant calculated from the rate measurements. The temperature effects on association are much greater than on dissociation; the activation energy for association is about 9Kca1/mole, as compared to 2Kca1/mole for dissociation. The use of small non-porous beads as a solid support in binding studies essentially avoids mass transfer limitations; such a system makes it possible to determine the intrinsic binding characteristics of any immobilized antibody on a solid surface.
고정화된 단세포군 항체와 항원인 알부민과의 결 합시 결합속도기작을 조사하였다. 항체의 고정화에 는 극소의 폴리스타이렌(37^{\circ}C)을 담체로 사용하여 결합속도 측정시 물질저항의 영향을 최소화하였다. 이론적 해석과 실험 결과는 결합반응이 속도론으로 제어됨을 보였는데 결합속도는 2차이고 분리속도는 1차임을 보인다. 고정화 항체와 항원의 평형실험으 로부터의 평형상수는 결합속도상수와 분리속도상수 의 측정치로부터 계산한 값들과 잘 일치한다. 속도 상수들을 $^{\circ}C~37^{\circ}C$에서 측정하였는데 결합속도상 수의 활성화에너지는 9kcal/mole이고 분리속도상수 의 활성화에너지는 2kcal/mole이다. 위의 연구 결과 들은 작은 담체의 사용이 결합속도 기작을 연구하는 데 물질전탈 저항의 영향을 제거할 수 있음을 보이 고 위의 실험 방법들은 고정화 항체의 고유 결합속 도의 측정에 유용할 것이다.