Optimal Production of Protease from Entomopathogenic Fungus Beauveria bassiana

곤충 병원성 곰팡이 Beauveria bassiana로부터 Protease의 최적 생산

We investigated the optimal condition for the production of extracellular pretense(a cuticle-degrading pretense) from entomopathogenic fungus Beauveria bassiana(ATCC7159) in liquid medium by adding of gelatin, bovine serum albumin(BSA), casein and polypeptone. The optimal induction medium for production of extracellular pretenses is composed of 0.5% polypeptone, trace elements and 50 mM potassium phosphate(pH 6.0). In this condition, the production of extracellular pretenses increased rapidly after the 24hrs, peaking at the third day and there was little inductive effect in culture broth more than pH 7.0. The pretenses were inhibited by phenyl methyl sulfonyl fluoride(PMSF). High activity of pretense was showed both range of pH 8.5 and 11.5 and also detected by three different portions of slice gel derived from non-denaturing isoelectricfocusing gel. At least three different extracellular pretenses are produced in optimal production medium when polypeptone is used as the sole carbon and nitrogen source.

곤충 병원성 곰팡이 Beauveria bassiana(ATCC7159)로부터 곤충 cuticle 분해 효소인 extracellular protease의 최적 생산 조건을 gelatin, vine serum albumin(BSA), casein 및 polypeptone 등을 첨가하여 조사하였다. 이 효소의 최적 생산 배양 조건은 미량원소를 함유한 0.5% Polypeptone, 50mM potassium phosphate pH 6.0이었다. 이 조건에서 pretense의 생산은 배양 1일 후부터 급격히 상승하여 배양 3일 이후 최대로 생산되었으며 배양액의 pH가 7.0 이상이 되면 효소 생산효과가 거의 없었다. 이 pretenses는 phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF)에 저해받는다. 효소 활성은 pH 8.5와 11.5에서 높게 나타났다. 또한 비변성 isoeletricfocusing gel 전기영동 후 각 gel 절편의 활성을 측정한 결과 protease활성이 세부분에서 나타났다. 따라서 탄소원 및 질소원으로 polypeptone을 이용하여 생산되는 pretense는 세종류 이상인 것으로 판단된다.