Abstract
Free amino acids were isolated from milk and their absolute amounts were determined by reversed phase high performance liquid chromatography after derivatization with dansyl chloride. The determination of D- and L-amino acids was based on achiral separation on a C18 column. It was found that milk contained totally 41.00 mg DL-amino acids in 100 mL milk. The level of D-amino acids to L-amino acids was determined by a column-switching system combining an achiral reversed phase separation and chiral chelate additive. The chiral separation was carried out with addition of the chiral Cu(N-benzyl-L-proline)2 chelate to the mobile phase in reversed phase liquid chromatography. It was found that the determination of 16 different amino acids is feasible in the milk sample with a C18 column separation and 12 D-amino acids out of the 16 amino acids can be determined via the column-switching system with chiral separation. 2.05% of D-glutamic acid and 2.93% of D-alanine were found in milk.
시중에 시판되고 있는 우유를 전처리하여 이 우유에 포함된 유리 아미노산을 dansyl-chloride로 유도체화시켜 C-18 컬럼을 이용한 역상 LC법으로 분리한 다음 표준물 첨가법으로 정량했다. 미량의 D-아미노산의 분리에서는 LC의 Column-Switching System을 이용하였으며 비키랄 컬럼을 통과한 단실 D/L-아미노산에 $Cu(N-benzyl-L-proline)_2$를 이동상에 첨가한 키랄 분리를 수행하여 L-아미노산에서 D-아미노산을 분리 정량했다. 이 방법은 우유시료 중에 존재하는 16가지 아미노산의 정량이 가능하며 이중에 12가지의 D-아미노산이 column switching 방법을 통한 키랄 분리로 정량이 가능하다. 우유 100 mL에 총 유리 아미노선이 41.00 mg 포함되어 있음을 확인했으며, D-아미노산은 D-glutamic acid가 2.05%, D-alanine 2.93%만이 포함되어 있음을 확인했다.