Expression of Mouse Adenosine Deaminase Gene in Transgenic Tobacco (Nicotiana tabacum L.)

형질전환 연초(Nicotiana tabacum L.)의 Mouse Adenosine Deaminase 유전자 발현

The mammalian adenosine deaminase(ADA) gene was stably expressed in transgenic tobacco plane. The chimeric ADA gene 35S/35S/AMV/ADA/Tnos, has been constructed. This chimeric gene was introduced into the binary vector pRD400, which was thereafter mobilized into Agrobacterium tumefaiens strain MP90 harboring disarmed Ti-plasmid. The resulting strains were used to transform Nicofiana tabacum L. using the leaf disc. Incorporation of the chimeric gene into plant were confirmed by PCR and Northern blot analyses. Immunoblot analysis showed that ADA protein was successfully synthesized in the transgenic tobacco plants.

동물유전자인 mouse adenosine deaminase (ADA)유전자가 안정적으로 연초 형질전환체에서 발현되었다. ADA cDNA 을 연초에서 강력히 발현시키기 위해서 35S/35S/AMV promoter을 부착시켰으며 식물세포에 도입을 위해서 binary vector인 pRD400을 이용하였다. 연초의 형질전환은 Tri- parental mating에 의해서 도입된 ADA 유전자 함유 binary vector와 disarmed Ti-plasmid을 함유하고 있는 Agrobacterium tmefacience MP9O을 사용하였다. 동시배양은 연초의 잎 disc을 이용해서 kanamycin이 첨가된 배지로부터 직접 shoots을 선발하여 형질전환체로 유도하였다. 형질전환 체에 ADA 유전자의 삽입여부는 PCR을 이용하였으며, 실험결과 ADA 유전자를 확인할 수 있었다. 또한 도입된 mouse ADA 유전자로부터 mRNA 및 단백질 합성여부를 각각 northern blot 및 immunoblot 분석한 결과 형질전환체 에서는 공히 확인되었다.