효소면역 분석법에 의한 아포지단백질 A-I 단일클론항체의 친화상수의 측정

Measurement of the Affinity Constant of Monoclonal Antibody to Human Apolipoprotein A-I by ELISA

본 연구에서는 효소면역진단법을 이용하여 사람의 아포지단백질 A-I에 대한 단일클론항체의 해리상수 (Kd)를 측정하고자 하였다. 먼저 단일클론항체와 항원을 평형에 도달할 때까지 액체상에서 반응시킨 후, 평형상태에서 항원과 결합하지 못하고 남아있는 항체를 미세적정판에 결합되어 있는 항원과 반응시킨다. 그 다음 결합된 항체의 양이 효소면역분석법에 의하여 측정한다. 본 실험방법 을 이용하여 측정된 아포지단백질 A-I에 대한 단일클론항체의 해리상수는 정제된 형태의 경우 0.625$\times$$10^{-9}$이었으며, 정제되지 않은 하이브리도마 배양액의 경우 0.720$\times$$10^{-9}$이었다. 이 방법은 간단하고 재생성이 높으며, 정확하고 방사선 동위원소를 사용하지 않는 등 많은 장점을 가진 것으로 생각된다.

The present study was undertaken to determine the dissociation constant (Kd)of monoclonal antibody to human apolipoprotein A-I (apo A-I) using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). First the monoclonal antibody was incubated in solution with the antigen until the equilibrium was reached; then the free antibody which remains unsaturated at equilibrium was captured by binding to antigen on the microtiter plate and be measured by a classical indirect ELISA. The value of Kd determined from Scatchard plot was 0.625$\times$10^{-9}$ for purified antibody and 0.720$\times$10$^{-9}$ for unpurified antibody. This method was valuable for the measurement of true dissociation constant and found to be simple, reproducible, and accurate.