인간 전과립 세포로부터 항미생물 인자의 생산에 관한 연구

Studies on Producing Anti-microbial Factor from Human Promyelocytic Cells

본 실험에서는 인간 전과립 세포를 회분배양 조건 에서 10%의 혈청을 포함하는 배지로 배양하였다. 이 와같은 조건에서 세포의 비성장율은 0.374C1/day) 이고 세포내 존재하는 살균활성을 가진 목적 단백질 의 생산성은 0.435(mg/10' viable cells)으로 나타났 다. 세포내 존재하는 목척 단백질의 순수 분리를 위 해 sephadex G-75, sephadex G-100, Bio→Rex70 을 이용해 분리하였다. 정제된 목적 단백질은 감수성 균주, E. coli IFO 13168과 St. aureus IFO 3060 을 표준 균주로 살균 측정을 하였을 때, 기존의 항생 물질은 균주에 대해 40~701땅1m!에서 활성을 나타 낸 반면, 정제된 목적 단백질은 G(+)균(St. aureus IFO 3060)에서는 $0.5\mu\textrm{g}$/ml이고, G(-)균(E. coli IFO 13168)에서는 $0.4\mu\textrm{g}$/ml에서 살균 활성을 보였다. 따라서 AMF가 기존 항생물질보다 살균 활성이 강력한 단백질임을 알 수 있다. 해당 분자량을 측정 하기 위해 SDS-PAGE로 측정한 결과 약 15,000 Dalton의 분자량을 갖고 있음이 확인됐다.

0.374(1/day) of specific growth rate and 0.435(mg/108 viable cells) of Anti-Microbial factor (AMF) productivity were obseaved for the batch cultivation of human promyelocytic cells in 10% serum containing medium. The crude protein was purified 10 folds by a serial purification steps of ion exchange chromatography, Bio-Rex 70 and gel filtration chromatography, Sephadex G-70 and 100. The ranges of MIC(Minimal Inhibitory Concentration) of commercially available antibiotics, penicillin G, streptomycin and ampicillin was estimated as 40 to ($70\mu\textrm{g}$/ml) on Gram (-) E. coli and Gram (＋) Streptococcus aureus. The values of the MBC (Minimal Bactericidal Concentration) of Purified AMF was ($0.5\mu\textrm{g}$/ml) and 0.4($\mu\textrm{g}$/ml), respectively. The molecular weight of the AMF was estimated as 15,000 dalton by SDS-PAGE.