Enterobacter agglomerans CBNU45로부터 분리된 제한효소 EagBI 의 특성

Characterizations of Restriction Endonuclease EagBI from Enterobacter agglomerans CBNU45

  • 최영주 (충북대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 김성재 (충북대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 황혜연 (서울대학교 자연과학대학 미생물학과) ;
  • 임정빈 (서울대학교 자연과학대학 미생물학과, 서울대학교 분자생물학 연구센터) ;
  • 김영창 (충북대학교 자연과학대학 미생물학과, 서울대학교 분자미생물학 연구센터)
  • Choe, Yeong-Ju (Department of Microbiology, Chungbuk National University) ;
  • Kim, Seong-Jae (Department of Microbiology, Chungbuk National University) ;
  • Hwang, Hye-Yeon (Department of Microbiology, Seoul National University) ;
  • Im, Jeong-Bin (Department of Microbiology, Seoul National University and Research Center for Molecular Microbiology, Seoul National University) ;
  • Kim, Yeong-Chang (Department of Microbiology, Chungbuk National University and Research Center for Molecular Microbiology, Seoul National University)
  • 발행 : 1994.01.01

초록

토양에서 분리된 Enterobacter agglomerans CBNU45는 type II 제한효소인 EagBI을 생산하고 있음을 발견하였다. EagBI을 DEAE-cellulose, phosphocellulose P11, hydroxylapatite column chromatography를 거쳐 부분 정제하여 그 특성을 알아보았다. EagBI은 여섯개의 염기배열 5’-CGAT${\downarrow}$CG-3’을 인식하고 T 와 C 사이를 절단하여 두개의 염기가 3’-말단쪽으로 돌출된 cohesive end를 형성하였다. EagBI의 반응 최적조건은 10mM Tris-HCl(pH 7.8), 6~10mM $MgCl_2$, 37${\circ}C$이었으며 NaCl이 없는 반응 완충용액에서 가장 좋은 활성을 보였다. EagBI은 $dam^-$$dam^+$ 메칠화 DNA도 절단할 수 있으며 65${\circ}C$에서 10분 동안 열처리하였을 때 효소의 활성을 상실하였다. 따라서 EagBI은 PvuI의 isoschizomer이나 NaCl 요구성과 열안정성에서 PvuI보다 편리한 제한효소로 확인되었다.

EagBI is a type II restriction endonuclease from Enterobacter agglomerans strain CBNU45 isolated from soil. EagBI was partially purified by DEAE-cellulose, phosphocellulose P11 and hydroxylapatite column chromatography. EagBI recognizes and cleaves the sequence 5'-CGAT${\downarrow}$CG-3' and generates 2-base 3'-protruding cohesive ends. The optimal reaction conditions of EagBI are 10 mM Tris-HCl (pH 7.8), 6-10 mM $MgCl_2$, at 37 ${\circ}C$. The enzyme is maximally active in the absence of NaCl, able to cleave both $dam^-$ and $dam^+$ DNAs, and sensitive to heat treatment (at 65 ${\circ}C$ for 10 min). Therefore, although EagBI is an isoschizomer of PvuI, it is more useful than PvuI in respect of the NaCl requirement and heat-stability.

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