염료착색 기질을 이용한 IEF gel에서(1-3)-$\beta$-glucanase 동위효소의 검출

Direct Detection of (1-3)-$\beta$-Glucanase Isozymes in Isoelectrofocusing Gels Using a Dye -Labeled Substrate

(1-3)-$\beta$-glucanase 동위효소의 발현 양상을 등 전점 전기영동 젤에서 직접 검출 확인할 수 있는 방법을 개발하였다. 개발된 방법은 시판되고 있는 (1-3)-$\beta$-glucanase활성 측정용 염료착색 기질을 이용하였다. 본 방법은 신속, 간편하며 보리 종자에서 발현되는 것으로 알려져 있는 모든 (1-3)-$\beta$glucanase 동위효소를 검출할 수 있을 정도로 민감하고 특이적이었다. 시판되고 있는 Penicillium(1-3)-$\beta$-glucanase에 대한 활성 검출 한계단위는 50 $\mu$U 정도로 추정되었다. 따라서, 본 방법은 특별한 시설이나 연구 인력을 확보하고 있지 않는 연구실에서 식물체의 (1-3)-$\beta$-glucanase발현에 대한 단백질 수준에서의 연구를 수행하는데 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

A procedure for the direct detection of (1-3)-$\beta$-glucanase isozymes in electrophoresis gels was developed. The procedure employed the commercial preparation of AZCL-pachyman as a chromogenic substrate for (1-3)-$\beta$-glucanases. The procedure detected the three basic isozymes which have been known to be expressed in germinating barley kernels. A major acidic and a minor isozymes were also detected in germinating kernels. The procedure was proved to be fast, simple and sensitive enough to be used for the analysis of the expression of (1-3)-$\beta$-glucanase isozymes in plant tissues. The detection limit of the procedure for the commercial preparation of Penicillium (1-3)-$\beta$-glucanase was estimated to be as low as 50$\mu$U. The procedure could be used for the investigation of (1-3)-$\beta$-glucanases in laboratories facilitated with ordinary equipments and research personnel.