Selection of Acid Tolerant Red Clover Cell Line on the Cellular Level II. Effect of some factors affecting suspension culture and acid tolerant cell selection

내산성 레드 클로-버의 배양세포수준에서의 선발 II. 레드 클로-버의 현탁배양 및 내산성 세포의 선발

This experiment was conducted to select acid tolerant cells from red clover suspension culture and obtained following results. The most effective condition of plant growth regulators for suspension culture of red clover cells was 2 mg/l 2,4-D as auxin source plus 0.5 mg/l BAP as cytokinin source. Among serveral basal media, PC medium brought the best result. The most suitable EMS concentration for the mutated cells tolerant to acid was 1 % with fours treatment and average 27 colonies/plate were selected. The frequency of the occurence of mutants tolerant to acid in 1 % EMS with four hours treatment was 8.9 $\times$ 10$^{-5}$ which was 100 times larger than that of control. The total colonies selected initially were 176 but the survived colonies after two subcultures with 4 weeks interval in a selection medium were 44.

레드 클로-버의 액체배양세포로부터 내산성 세포선발에 대한 몇가지 요인들의 영향을 규명하기 위한 실험으로 부터 다음과 같은 결과들을 얻었다. 액체배양세포의 유도에는 auxin원으로 2,4-D 2 mg/l와 cytokinin으로 BAP 0.5 mg/l를 혼합처리한 것이 가장 좋았으며, 여러가지 기본배지중 PC배지가 액체배양세포의 유도에 가장 효과적이었다. 내산성 세포를 선발하기 위하여 EMS를 여러가지 농도에서 4시간 처리했을 때, 가장 효율적인 EMS농도는 1 %였으며 이 때 plate당 평균 27개의 colony가 선발되었다. 1%의 EMS를 처리한 결과 내산성 세포발생빈도는 8.9$\times$$10^{-5}$으로서 EMS 무처리구의 100배나 높은 수준으로 나타났으며 최초에 선발된 변이주는 총 176주였으나 선택배지에서 4주간격으로 2회 계대배양 후 살아남은 colony수는 44주였다.