Abstract
An assay system by using antibody was adopted to screen the endoinulinase producingfungi due to its high specificity toward endoinulinase, To determine whether the affinity-purified rabbit serum, which were generated against the purified endoinulinase, can react only with the endoinulinase, rocket immunoelectrophoresis was performed. The results showed that the serum specifically reacts with endoinulinase but not with exoinulinase and other proteins in the culture media. Using this polyclonal antibody, a strain from 62 fungal colonies was selected and it secreted an endoinulinase in the culture media to the amount comparable to that of Aspergillus ficuum A Tee 16882 known as a high endoinulinase producer.
Oligofructo당 생산에 이용될 수있는 endoinulinase 분석방법은 그 균주가 endo- 및 exoinulinase를 함께 내는 경우, 일반적인 환원당 분석법으로는 정량하기가 어려워진다. 이 실험에서는 endoinulinase만을 선택적으로 정량하기 위한 하나의 방법으로써 항체 분석법을 이용하였다. Aspergillus niger ATCC 16882 조효소액을 CM-DEAE ion exchange chromatography, pI 2.5-5에서 preparative isoelectric focusing, HPLC gel filtration을 통해 순수하게 endoinulinase에 대한 항체를 얻었다.DEAE-ion exchange 및 protein A에서 정제된 이항체는 immunoassay 한 결과, exoinulinase 가 아닌 endoinulinase와 만 특이하게 반응하였고, immuno affinity chromatography 결과들은 배양액 중의 다른 단백질과 반응하지 않음이 확인되었다. 이눌린을 유일한 탄소원으로 한 배지에서 자란 1200여개의 야생균주들로부터 배양 특성이 우수한 균주를 1차로 선별하고 이 균주들의 endoinulinase 함량을 rocket immunoassay를 통하여 조사하였다. 이 중 1개의 균주는 Novozyme의 ATCC 1688와 비교할만한 정도의 endoinulinase를 배양액 중에 분비함을 확임할 수 있었다.
