Abstract
The comparison of the capabilities of cell growth of four different kinds of commercially available microcarriers was carried out by culturing anchorage-dependent animal cells, Vero-6, in a spinner flask. Using 3 g/l of Cytodex 3, the maximum final cell density was about $1.4{\times}10^6$ cells/ml and increased up to $2.0{\times}10^6$ cells/ml by increasing microcarrier concentration up to 5 g/l. The macroporous collagen microcarriers, VX-100, informatrix, and Cultispher-G showed the final cell concentration of $4{\times}10^6$ cells/ml, $2.1{\times}10^6$ cells/ml, and $3.2{\times}10^6$ cells/ml, respectively at the microcarrier concentration of 5g/1. According to this result, VX-100 showed better cell growth than informatrix and cultispher-G and also showed about 2 fold increase in final cell density comparing to Cytodex 3 solid bead. When the intermittent bead-to-bead transfer technique was introduced in the culture using Cytodex 3 bead and cultispher-G, the result was very successful and the cells grew out very well. The recovered cells by dissolving collagen microcarrier using collagenase enzyme were mostly viable and grew out very well on the surface of the fresh microcarriers.
현재 상품화되어 시판되고 있는 4가지의 미립담체를 이용해 각각의 성능을 비교하기 위하여 부착성동물세포배양 실험을 수행한 결과를 요약하면 다음과 같다. Cytodex 3의 경우 세포의 초기 접종농도를 약 $2.0{\times}10^5$ cells/ml로 하였을 때, 3g/l는 약 $1.4{\times}10^6$cells/ml, 5g/l는 약 $2.0{\times}10^6$cells/ml의 최종세포밀도를 얻을 수 있었다. 또한 bead-to-bead trandsfer 실험을 한 결과 3g/l를 간헐적으로 첨가하였을 때는 약 $1.9{\times}10^6$cells/ml, 5g/l 첨가하였을 때는 약 $3.0{\times}10^6$cells/ml까지 최종세포밀도가 증가하였다. Cultispher-G, 3g/l를 이용해 초기 접종농도를 약 $2.0{\times}10^6$cells/ml로 하여 배양하였을 때 약 $1.3{\times}10^6$cells/ml까지 세포농도가 증가했고, 5g/l를 이용해 초기 접종농도를 $4.0{\times}10^5$cells/ml로 접종하였을 때 최종세포농도가 약 $3.2{\times}10^6$cells/ml까지 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 그리고 bead-to-bead transfer배양 실험결과에서 3g/l의 미립담체를 간헐적으로 첨가해 약 $1.8{\times}10^6$cells/ml까지 최종세포밀도가 올라갔고 5g/l를 간헐적으로 첨가하였을 때 $2.5{\times}10^6$cells/ml까지 세포밀도를 얻었다. VX-100을 사용하여 세포를 배양하였을 때 초기 접종농도가 약 $2.0{\times}10^5$cells/ml에서 최종세포밀도가 약 $4.4{\times}10^6$cells/ml까지 증가하는 것을 알게 되었다. 따라서 실험에 사용한 다른 종류의 다공성 젤라틴 bead보다 성능이 우수함을 알 수 있었고 Cytodex-3보다는 최종세포농도가 약 2배이상 증가한 결과를 얻었다. Informatrix bead는 초기 접종농도를 약 $3.0{\times}10^5$cells/ml로 하였을 때 최종세포밀도가 약 $2.1{\times}10^6$cells/ml까지 증가하였다. Collagenase효소를 이용하여 젤라틴 bead를 녹인 후 회수한 세포는 대부분 viable하였고 새로 도입된 bead에 성공적으로 부착하여 성장하였다. 따라서 담체 내부에서 자라는 세포도 회수하여 재사용 할 수 있게 되었다.
