고정화 효소컬럼을 이용한 콜스테롤 측정용 Flow Injection Analysis 시스템의 개발

Development of Flow Injection Analysis System for Amperometric Determination of Cholesterol Using Immobilized Enzyme Columns

고정화 효소를 이용하여 콜레스테롤을 신속, 정확 하게 측정할 수 있는 Flow injection analysis(FIA) 시스댐을 개발하였다. 콜레스테롤 산화효소와 콜레 스테롤 에스테르 가수분해효소를 cantrall어 pore g glass과 glutaraldehyde를 사용해 얻어진 고정화 효 소를, 유리관에 충진해 얻어진 컬럼은 약 3-5 I. U. 의 활성을 나타내였다. 백금을 이용해 구성된 전극 은 +600mV에서 효소반응 결과 생성된 과산화수소 에 대해 특이적으로 응답하였다. 구성되어진 FIA시 스템의 분석능을 향상시키기 위하여 시료량, 캐리어 용액의 유속과 조성 풍의 변화에 따른 응당올 조사 하였다. 최적화된 운영조건하에서 유리 콜레스테롤 과 콜레스테롤 에스테르 표준용액에 대한 응답은 각 각 60, 400mg/ml까지 선형성(r=0.994 빛 0.998) 을 나타내였다. 모든 시료의 분석은 정확, 정밀( <2. 5 5%)한 것으로 조사되었다. 시간당 23회의 분석이 가능하였고, 500회의 간혈분석 후에 응답감도가 약 반으로 감소하였다.

A flow injection analysis(FIA) system was developed for the determination of cholesterol using immobilized cholesterol oxidase and cholesterol ester hydrolase. The enzymes were immobilized on controlled pore galas(CPG) by the glutaraldehyde method. The glass colunms packed with immobilized enzymes were found to contain 3-5 I.U. for each enzyme. A hydrogen peroxide sensitive electrode was contructed and applied to the FIA system. The operational conditions for FIA response were investigated and optimized with variation of sampling volume, flow rate and composition of carrier solution. The FIA response were linear upto 60 and 400mg/m1 for free cholesterol and cholesterol ester, respectively. All samples were analyzed with a good precision (<2.5% CV) and accuracy. 23 samples were mea sured succesively within about an hour. Intermittent assays of more than 500 times caused 50% decrease in response sensitivity.