미생물학회지 (Korean Journal of Microbiology)

  • 제31권2호
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  • Pages.123-128
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  • 1993
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  • 0440-2413(pISSN)
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  • 2383-9902(eISSN)
한국미생물학회 (The Microbiological Society of Korea)
권호 표지

Rhizobium sp. SNU003의 nifHD 클로닝

Molecular Cloning of nifHD from Rhizobium sp. SNU003

  • 강명수 (서울대학교 자연과학대학 생물학과) ;
  • 안정선 (서울대학교 자연과학대학 생물학과)
  • 발행 : 1993.04.01
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초록

해녀콩 뿌리혹의 질소고정 공생균인 Rhizobium sp. SNU003 균주의 게놈내 7.9 kb 의 EcoRI, 6.5kb 의 SalI, 7.3 kb 의 HindIII 와 4.4 kb 의 PstI 절편에 nifHD 가 존재함을 확인하였다. 람다파아지 EMBL3-BamHI arm 을 사용하여 genomic library 를 제조하였으며 이로부터 nif-유전자를 포함하고 있는 9개의 재조합 파아지 클론을 선별하였다. 이들 중 15.3 kb 의 삽입 DNA 를 가지고 있는 Rnif-6 클론은 7.6 kb 의 BamHI/SacI 절편에 nifHD 가 위치하고 있었다. 따라서 이절편을 pUC19 에 sub cloning 하고 제한효소 지도를 작성한 결과 Rhizobium sp. SNU003 의 nifH 와 nifD 는 4.5 kb 의 BamHI/BglII 절편에 연속배열하고 있다.

Genes for dinitrogenase reductase (nifH) and dinitogenase a subunit (nifD) were found to be located on 7.9 kb of EcoRI, 6.5 kb of Sail, 7.3 kb of HindlII and 4.4 kb of Pstl fragments of the genomic blot of Rhizobium sp. SNU003. a symbiotic strain from root nodule of Canavalia lineata. Nine recombinant phage nif-clones were selected from the genomic library constructed by using EMBL-3 BamHI arms of bacteriophage lambda. Among them. Rnif-6 had insert DNA of 15.3 kb. in which 7.6 kb of BamHI!SacI fragment contained nifHD region. Therefore, the 7.6 kb fragment was subcloned into pUC19 and partial restriction map was constructed. As the results, nifH and nifD were found to be located continuously on 4.5 kb of BamHI/BglIl in the genome of Rhizobium sp. SNU003 strain.

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