Protoplast Formation and Regeneration from Mycelia of Phytophthora capsici

Phytophthora capsici의 균사체(菌絲體)로부터 원형질체(原形質體) 형성(形成)과 재생(再生)

ABSTRACT: Factors responsible for protoplast formation and regeneration of Phytophthora capsici were examined. Protoplasts were successfully liberated from the mycelial culture by digestion for 6-9 hrs with Novozym 234 in 0.35 M $CaCl_2$, (pH 5.7) as osmotic stabilizer. Young rapidly-growing mycelium (24 hrs old) showed highest protoplast yields. High concentrations of Novozym 234 were effective in releasing protoplasts from the mycelium. The combination of 0.4 M mannitol and 0.1 M $CaCl_2$ was optimal osmotic stabilizers for protoplast regeneration. The synthetic Henninger media containing all nutritional elements gave the best regeneration rate. The protoplast regeneration was greatly inhibited in the media which were not supplement with amino acids or ${\beta}-sitosterol$. Certain amino acids such as L-aspartic acid and L-glutamic acid remarkably enhanced protoplast regeneration. However, the addition of microelements did not affect protoplast regeneration.

Phytophthora capsici에서 원형질체를 형성, 재생 시키는데 관여하는 요인에 대해 조사연구하였다. 삼투압조절제로서 0.35 M $CaCl_2$가 첨가된 Novozym 234를 6-9시간 처리하면 균사체에서 원형질체가 양호하게 나출되었다. 24시간 배양한 어린 균사체에서 가장 많이 원형질체를 나출시킬 수 있었으며, 또한 Novozym 234의 농도가 진할수록 효과적으로 원형질체가 나출되었다. 원형질체를 재생시키는데는 0.4 M mannitol과 0.1 M $CaCl_2$를 혼합한 것이 삼투압 조절제이었다. 원형질체의 재생률은 모든 영양소가 첨가된 Henninger 합성배지에서 가장 높았다. 아미노산이나 ${\beta}-sitosterol$은 원형질체의 재생에 영향을 미쳐 두 영양소가 빠지면 원형질체의 재생이 억제되었다. 특히 아미노산 중 L-aspartic acid와 L-glutamic acid는 원형질체의 재생을 촉진시켰다. 그러나, 미량원소는 원형질체의 재생에 영향을 주지 않았다.