New Adaptation Process to Serum Free Media for the Growth of Serum-requiring Human Cell Line

혈청 요구성 세포의 생육을 위한 무혈청 배지의 새로운 적응 공법

Sprial adaptation technique of conditioned media has been applied to cultivate human cell line which can not survive in a serum free mdium without adding any growth factors in basal medium Doubling time and scu-PA production from serum free adapted cells were 5 days and 890 (IU/mL), respectively in a T-flask, whose values were not much lower than the productivity of 1100(IU/mL) from 5% serum containing medium. It was required to use conditioned media for attaching cells on microcarriers when cells were inoculated into a spinner vessel. Then, cells could continuously grow in serum free medium with having specific growth rate of 0.106 (1/day) and specific scu-PA production rate of $1.58{\times}10_{-5}$(IU/cell/day) in batch cultivation.

생육 인자가 들어있지 않은 순수한 무혈청 배지에서 생육이 불가능한 사람 세포인fibroblasts를 배양한 배양액과 혼합된 배지를 연속적으로 희석 배양하는 방법으로 4계대를 거친 후에 순수 무혈청 배지에서 생육이 가능한 상태로 적응 시켰다. 이 세포는 순수 무혈청 배지에서 배수 증식기를 약 5일로 유지하며 지속적으로 성장했다. 이같은 생육 속도는 혈청이 포함된 배지에서 보다 느리지만 scu-PA 생산양은 890(1U/mL)로서 5%혈청이 포함된 배지에서1100(1U/mL)와 비교해 그리 큰 차이는 없다. 또한 적응된 세포의 bioreactor로의 scale-up때 초기 접종시 혼합 배지를 사용해 접착성을 향상 시킨 후에는 무 혈청 배지로 성장이 가능했으며, 생육 및 물질 생산성은 회분 배양시 최대 세포수가$8.5{\times}10^5$(viable cell/mL)와 약 6.5일의 배수 증식 속도로 혈청이 포함된 경우보다 낮지만 약 830(1U/mL)의 scu-PA를 생산해 물질 생산은 상대적으로 높아 단백질이 전혀 없는 무혈청 배지에서 경제적 생산 및 분리 수율의 향상이 가능하다. 또한 수수 무혈청 배지로 회분배양해 0.106(1/day)의 비 생육 속도와$1.5{\tines}10^{-5}$(1U/cell/day)의 비생산 속도를 얻었다. HEK sub. 6-SF 세포주의 보다 정확한 산업적 응용의 타당성 확인을 위해 차기 연구로 무혈청 배지에 적응된 세포주의 연속 배양에 의한 세포 생육 및 물질 생산성을 검토해야 할것이다.